改善極性、酸性、堿性和酚類化合物的分離 - ACE C18-Amide色譜柱

ACE® C18-Amide
• 用于方法開發(fā)的替代選擇性
• 改善極性、酸性、堿性和酚類化合物的分離
• 用于UHPLC和HPLC的高柱效2μm、3μm、5μm和10μm顆粒
• 超惰性，可獲得最佳性能和可重現(xiàn)性
ACE C18-Amide液相色譜柱
用于提高極性保留和替代選擇性
方法開發(fā)的理想色譜柱選擇
■ 相對C18和C8色譜柱，對極性分子 - 特別是酸類，具有替代選擇性
■ 與100%水含量的流動相兼容
■ 用于UHPLC、HPLC和制備型分離的高柱效2μm、3μm、5μm和10μm顆粒
■ UV和LC/MS兼容性的低流失

推薦應(yīng)用
■ 小分子水溶性分析物和極性化合物
■ H鍵給予體、酸類、堿類和酚類化合物
■ 小分子多肽








為什么ACE C18-Amide液相色譜柱可以提供替代選擇性？
■ ACE C18-Amide將C18與極性酰胺基結(jié)合在單一配體上
■ 延長間隔區(qū)技術(shù)可以額外延長色譜柱的使用壽命



利用ACE C18-Amide液相色譜柱的選擇性能力將色譜峰分開
分離度方程可以確定影響分離度的參數(shù)：N、α和k。近年來，
重點(diǎn)關(guān)注使用超高效“UHPLC”色譜柱（如ACE Excel 2μm色
譜柱）作為實(shí)現(xiàn)分離目標(biāo)的手段。

然而，選擇性往往被忽視。
在影響分離度的三個參數(shù)中，選擇性是最為重要的（參見圖1）。
通過利用柱效和選擇性，通�？梢詫�(shí)現(xiàn)更好和更快的分離。
ACE C18-Amide液相色譜柱是ACE系列鍵合相的最新產(chǎn)品，其可以提供互補(bǔ)選擇性和2μm、3μm、5μm和10μm粒徑的選擇，以開發(fā)堅(jiān)固耐用的UHPLC和HPLC方法。
圖1 N、α和k對分離度(Rs)的影響
對于N = 10,000、k = 4和α= 1.1的典型分離

增加N、α或k可以增加分離度（Rs），但是從上圖可以看出，N或k的增加都會迅速降低回報率。增加選擇性（α）則不會發(fā)生這個問題，因此其在開發(fā)分離方法時是這三個變量中最為重要的優(yōu)化參數(shù)。


利用ACE鍵合相的固定相選擇性能力將色譜峰分開
圖2闡明了兩種ACE鍵合相即C18-Amide與C18之間的差異。
盡管這兩種鍵合相均可以提供可能的來自它們各自C18鏈的強(qiáng)疏水作用，但嵌入C18-Amide相中的酰胺基會引入額外的相互作用模式，最終增加極性化合物的保留并提供替代選擇性。

樣品：1）間苯二酚 2）兒茶酚 3）2-甲基間苯二酚 4）4-甲基鄰苯二酚5）3-甲基鄰苯二酚 6）4-硝基鄰苯二酚
流動相：25:75乙腈/27mM H3PO4（溶于水中）
色譜柱尺寸：150 x 4.6mm
流速：1.50ml/min
溫度：30℃
波長：270nm


ACE C18-Amiede液相色譜柱可以使極性選擇性增強(qiáng)
ACE C18-Amide與領(lǐng)先C18 UHPLC色譜柱的比較



色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
樣品：1）間苯二酚 2）兒茶酚 3）2-甲基間苯二酚 4）4-甲基鄰苯二酚 5）3-甲基鄰苯二酚 6）4-硝基鄰苯二酚
流動相：25:75甲醇/25mM H3PO4（溶于水中）
流速：0.30ml/min
溫度：30℃
波長：214nm
比較數(shù)據(jù)不代表所有應(yīng)用。


利用替代選擇性來進(jìn)行方法開發(fā)
酸性、堿性和中性化合物的分離

樣品：1）甲基苯基亞砜 2）吲哚洛爾 3）3-羥基苯甲酸 4）1,2-二甲氧基苯 5）小檗堿 6）楊梅素 7）胡椒堿 8）白楊素
流動相：A = 20mM甲酸銨（溶于水中）（pH 3.0）B = 20mM甲酸銨（pH3.0）（溶于90:10（v/v）甲醇/水中）
梯度：在5分鐘內(nèi)3 – 100% B
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
流速：0.60ml/min
溫度：40℃
波長：254nm


與100%水含量的流動相兼容
葡萄酒中有機(jī)酸的分離

樣品：1）草酸 2）酒石酸 3）蘋果酸 4）乳酸 5）抗壞血酸 6）檸檬酸
流動相：40mM NH4H2PO4（溶于水中）(pH 2.5)
色譜柱：ACE Excel 3 C18-Amide, 250 x 2.1mm
流速：0.21ml/min
溫度：25℃
波長：214nm


ACE C18-Amide可以提供替代選擇性
食品和飲料添加劑 - 香草醛



樣品：1）香草酸 2）4-羥基苯甲酸 3）香草醛 4）4-羥基苯甲醛 5）愈創(chuàng)木酚 6）乙基香草醛 7）丁香酚
流動相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中）
梯度：在10分鐘內(nèi)30 – 55% B
色譜柱尺寸：150 x 4.6mm
流速：1.00ml/min
溫度：40℃
波長：260nm


類固醇



樣品：1）潑尼松 2）潑尼松龍 3）雌三醇 4）皮質(zhì)酮 5）11a-羥孕酮 6）11-酮孕酮 7）21-羥孕酮 8）β-雌二醇 9）17α-雌二醇 10）17α-乙炔基雌二醇
流動相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中）
梯度：在10分鐘內(nèi)25 – 80% B
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
流速：0.40ml/min
溫度：25℃
波長：260nm


有保證的可重現(xiàn)性和完全可擴(kuò)展性
ACE C18-Amide的可重現(xiàn)性擴(kuò)展

樣品：1）尿嘧啶 2）4-羥基苯甲酸 3）乙酰水楊酸 4）苯甲酸 5）2-羥基苯甲酸 6）對羥基苯甲酸乙酯
流動相：35:65乙腈/0.1%TFA（溶于水中）
溫度：22℃
波長：254nm
將可用的2μm、3μm、5μm和10μm粒徑與從UHPLC到制備型HPLC規(guī)模的一系列柱尺寸相結(jié)合，可確保方法可重現(xiàn)地放大或縮小。
圖8中的色譜圖顯示，當(dāng)硅膠批次和硅烷批次改變時可以獲得卓越的可重現(xiàn)性，并當(dāng)粒徑和柱直徑改變時可以獲得可重現(xiàn)的可擴(kuò)展性。





產(chǎn)品的可用性和規(guī)格


 

相	官能團(tuán)	封端	粒徑（µm）	孔徑（Å）	表面積（m2/g）	碳載量	最大pH范圍	100%水相兼容	USP列表
ACE C18-Amide	具有完整酰胺極性基團(tuán)的十八烷基	是	2, 3, 5, 10	100	300	16.4	2.0-8.0a	Yes	L1/L60

為了獲得最佳色譜柱壽命，推薦使用2-8的pH范圍。為了在較高的pH值下增加色譜柱壽命，必須考慮有機(jī)緩沖液、低緩沖液濃度、高%有機(jī)溶劑和低溫。
為了在HPLC條件（高達(dá)5000psi/350bar）下進(jìn)一步延長色譜柱壽命，推薦使用ACE保護(hù)柱芯柱或ACE HPLC柱前過濾器。
為了在UHPLC條件（高達(dá)15000psi/1000bar）下進(jìn)一步延長色譜柱壽命，推薦使用ACE UHPLC柱前過濾器。
對于高達(dá)5000psi（350bar）的HPLC色譜柱連接器，推薦使用PEEK手緊接頭（p/n ACE-CC10）。
對于高達(dá)15000 psi（1000bar）的UHPLC色譜柱連接器，推薦可重復(fù)使用的接頭（p/n EXL-CC10）。
ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注冊商標(biāo)。ACE Excel™是Advanced Chromatography Technologies Limited的商標(biāo)。Advanced Chromatography Technologies Limited承認(rèn)Agilent Technologies Inc.、Phenomenex Inc.、Thermo Fisher Scientific和Waters Corporation的注冊和未注冊商標(biāo)，且與上述這些公司沒有任何隸屬關(guān)系。