帶你重新認(rèn)識(shí)CD3e和人源化CD3e小鼠（B-hCD3e mice）

在這“草長(zhǎng)鶯飛”的季節(jié)，帶你重新認(rèn)識(shí)CD3e！

背景介紹

CD3e( CD3e molecule)編碼CD3-epsilon多肽，與CD3-gamma，-delta，-zeta和體細(xì)胞受體alpha/beta或gamma/delta共同構(gòu)成TCR-CD3復(fù)合物。此復(fù)合物在抗原識(shí)別和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑方面起著非常重要的作用。近年來(lái)，利用人CD3和腫瘤相關(guān)抗原（TAA）的雙特異性抗體進(jìn)行抗腫瘤治療手段被廣泛研究。

但由于小鼠CD3復(fù)合體的胞外區(qū)與人類(lèi)種間同源性相對(duì)較低，人CD3特異性治療抗體不能有效激活小鼠效應(yīng)T細(xì)胞，需建立一個(gè)適合于評(píng)估人類(lèi)CD3特異性治療的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。百奧賽圖人源化CD3e小鼠（B-hCD3e mice）,為雙抗的藥效驗(yàn)證提供了有力工具。

TCR-CD3 complex and its signal pathway^[1]

mCD3e全人源化小鼠分析

將mCD3e全人源化替換為hCD3e，對(duì)純合后代脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)進(jìn)行流式細(xì)胞分析，觀察小鼠T細(xì)胞發(fā)育是否正常。

以上研究結(jié)果表明，相對(duì)于野生型，hCD3e全人源化純合小鼠脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)中mCD3⁺細(xì)胞含量較低且CD4、CD8分化差異較大，表明全人源化策略致其T細(xì)胞發(fā)育過(guò)程受阻，此方案制備的小鼠不適于后續(xù)藥理藥效評(píng)價(jià)。

基于此，考慮到全人源化可能對(duì)mCD3e胞內(nèi)信號(hào)傳遞的影響，百奧賽圖重新優(yōu)化打靶方案，僅對(duì)mCD3e進(jìn)行胞外區(qū)人源化改造，保留其鼠源的信號(hào)傳導(dǎo)功能，得到B-hCD3e mice.同樣對(duì)其純合后代脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)進(jìn)行流式細(xì)胞分析，結(jié)果如下：

以上研究結(jié)果表明，mCD3e胞外區(qū)人源化純合小鼠(B-hCD3e mice)脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)中，各細(xì)胞細(xì)胞比例與野生型小鼠相比無(wú)顯著差異，表明T細(xì)胞分化未受胞外區(qū)人源化改造影響。

不是所有人源化小鼠都能有正常功能，不是所有CD3人源化小鼠都叫B-hCD3e mice哦！

后續(xù)基于B-hCD3e mice模型的體外檢測(cè)及體內(nèi)藥效等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也進(jìn)一步證明了該模型的優(yōu)勢(shì)所在，具體信息如下所示：B-hCD3e mice基本信息
 

基本信息


打靶策略

蛋白表達(dá)分析

流式分析結(jié)果顯示：野生型 C57BL/6 小鼠中檢測(cè)到mCD3⁺蛋白表達(dá)，純合B-hCD3e小鼠中檢測(cè)到hCD3⁺蛋白表達(dá)。 

體外檢測(cè)CD3抗體激活T細(xì)胞

從野生型C57BL/6和純合B-hCD3e小鼠的脾細(xì)胞中分離T細(xì)胞 (n=4)，與抗CD3抗體(B-hCD3e, anti-hCD3；C57BL/6, anti-mCD3)及抗mCD28抗體孵育24h, 48h，72h。ELISA檢測(cè)IFN-γ and IL-2.

結(jié)果表明：IFN-γ 和 IL-2的表達(dá)水平在B-hCD3e和C57BL/6中無(wú)顯著差異。

CD3抗體藥效實(shí)驗(yàn)

   

C57BL/6(A) 和B-hCD3e(B)接種MC38細(xì)胞系，待腫瘤體積約150±50mm³ 后分組（n=5），結(jié)果顯示：兩種小鼠模型中，mPD-1抗體均顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，表明：胞外區(qū)人源化改造對(duì)B-hCD3e小鼠T細(xì)胞的胞內(nèi)信號(hào)傳遞無(wú)明顯影響。同時(shí)，hCD3e抗體顯著促進(jìn)B-hCD3e小鼠腫瘤生長(zhǎng)，而對(duì)C57BL/6小鼠腫瘤的生長(zhǎng)基本無(wú)影響。進(jìn)一步研究表明：給藥（hCD3e抗體）后出現(xiàn)AICD效應(yīng)，B-hCD3e小鼠T細(xì)胞被清除，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。

流式檢測(cè)外周血中B細(xì)胞和T細(xì)胞比例

 

結(jié)果顯示：hCD3抗體組中，由于hCD3e抗體引起AICD效應(yīng)，T細(xì)胞比例顯著降低。但B細(xì)胞比例無(wú)明顯變化。（A）與hIgG Ab相比，CD19細(xì)胞各組間無(wú)顯著性差異。（B）與hIgG Ab相比，h-CD3 Ab治療后血液中TCR-β%降低。

基于B-hCD3e小鼠的雙特異性抗體藥效實(shí)驗(yàn)

接種hCD19-MC38細(xì)胞系至小鼠皮下，腫瘤組織接近150±50mm³時(shí)進(jìn)行分組（n=6），注射高、中、低不同劑量的Blinatumomab。

結(jié)果表明：高劑量的hCD3e雙特異性抗體（Blinatumomab）能夠顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)。證明B-hCD3e小鼠可以評(píng)估雙特異性抗體體內(nèi)藥效。A.腫瘤體積±SEM B.小鼠平均體重±SEM。

參考文獻(xiàn)

[1]Immunology. 2018 Jan;153(1):42-50. doi: 10.1111/imm.12809. Epub 2017 Sep 5.

百奧賽圖雙抗動(dòng)物模型列表

  

百奧賽圖雙抗細(xì)胞系模型列表