溶酶體熒光探針原理介紹

溶酶體熒光探針​
      溶酶體為單層膜蛋白包圍的內(nèi)含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶，如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等，是物質(zhì)代謝的場(chǎng)所。
      弱堿性胺選擇性聚集在胞內(nèi)低pH值的小室中，可用于研究溶酶體的生物合成和發(fā)病機(jī)理。其中最常用的就是DAMP，它不發(fā)熒光，需要和抗DNP的抗體共同使用，來(lái)觀察染色模式。中性紅、吖啶橙等熒光探針也常用于酸性細(xì)胞器的染色，不過(guò)它們?nèi)狈μ禺愋浴?br />        LysoTracker探針就是Invitrogen開(kāi)發(fā)的向酸性熒光探針，用于標(biāo)記和追蹤活細(xì)胞中的酸性細(xì)胞器。這些探針有幾個(gè)重要的特征：對(duì)酸性細(xì)胞器的高選擇性，在納摩爾濃度下能對(duì)活細(xì)胞有效標(biāo)記。而且，LysoTracker探針有幾種不同的顏色，適合多色標(biāo)記。
       LysoTracker探針是細(xì)胞膜通透性的，一般聚集在球形的細(xì)胞器中。研究人員發(fā)現(xiàn)探針在極低濃度（～50 nM）下選擇性最佳。此外，較大的酸性細(xì)胞器在LysoTracker Red DND-99染色后，經(jīng)過(guò)甲醛固定仍保留其染色模式。
對(duì)于那些想研究溶酶體生物發(fā)生動(dòng)力學(xué)的研究人員來(lái)說(shuō)，LysoSensor探針可謂量身定做。                LysoSensor染料是向酸性的探針，由于質(zhì)子化作用聚集在酸性細(xì)胞器中。質(zhì)子化也緩解了染料的熒光淬滅，使熒光強(qiáng)度增加。因此，LysoSensor在酸化的環(huán)境中表現(xiàn)出pH依賴的熒光強(qiáng)度增加，而LysoTracker探針的熒光則沒(méi)有明顯變化。
        Invitrogen提供了5種LysoSensor試劑，pKa不同，顏色各異。LysoSensor Blue DND-167和LysoSensor Green DND-189的pKa值很低，處于酸性環(huán)境中才會(huì)發(fā)出熒光，而LysoSensor Green DND-153在中性pH下就發(fā)出很強(qiáng)的熒光。LysoSensor Yellow/Blue DND-160很特別，具有雙激發(fā)和雙發(fā)射峰，是pH依賴的。在酸性細(xì)胞器中，它主要發(fā)黃色熒光，而在弱酸性細(xì)胞器中，熒光則為藍(lán)色。LysoSensor Yellow/Blue DND-160曾與fluo-3 AM共用，來(lái)同時(shí)測(cè)量兔胃腺中H+ 和Ca2+，以確定類膽堿和cAMP依賴通路激活后胃酸分泌的動(dòng)力學(xué)。
除了上面這些傳統(tǒng)的熒光探針，Invitrogen的Organelle Lights?熒光蛋白也是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。Organelle Lights是即用型的熒光蛋白載體，融合了信號(hào)肽，能將表達(dá)的熒光蛋白定位到亞細(xì)胞器中，如核、質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和過(guò)氧化物酶體等等。顏色有青、綠、橙、紅幾種。它通過(guò)改造的可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的桿狀病毒（BacMam virus）將熒光蛋白導(dǎo)入胞內(nèi)，不僅安全，而且適合多種細(xì)胞類型，包括原代細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。你只需要將試劑加到細(xì)胞中就行了，既不需要轉(zhuǎn)染，也不需要對(duì)細(xì)胞做任何處理，用起來(lái)相當(dāng)方便。
      LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針 可被活細(xì)胞極快速地吸收；加入染料后 1 至 5 分鐘即可達(dá)到最佳成像效果  Ex/Em：73/422， 樣本類型：活細(xì)胞
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