WB實(shí)驗(yàn)虐我千百遍，我待實(shí)驗(yàn)如初戀

瀏覽次數(shù)：3961　發(fā)布日期：2019-7-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

大家都知道Western Blot時(shí)間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風(fēng)悲畫扇。經(jīng)歷轉(zhuǎn)瞬即逝的新手曙光后，便進(jìn)入漫長的黑夜。

第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細(xì)心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護(hù)。第二天經(jīng)過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，都需要耐心，之后便迎來了驗(yàn)證奇跡的一刻：顯影，皆大歡喜或者一切皆空。像極經(jīng)歷愛情的磨合期，也有兩個(gè)極端走向，婚姻的殿堂，或者以分手草草了事。

大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)發(fā)光（ECL）方式，品牌，儀器眾多，當(dāng)然結(jié)果也良莠不齊。頓時(shí)回憶起當(dāng)時(shí)做實(shí)驗(yàn)的點(diǎn)點(diǎn)滴滴，前面的工作繁瑣而充實(shí)，一天下來覺得很滿足，第二天既期待又緊張，期待有個(gè)完美的結(jié)果，但又擔(dān)心事與愿違。大家懷揣著一顆忐忑不安的心走近暗室或者成像儀。隨后便傳來“為啥背景那么深，為啥沒有目的條帶，為啥分子量不對(duì)，被裁掉了…”一系列咆哮不絕于耳，大家都習(xí)以為常，相視一笑，接著做自己的事。經(jīng)過忙碌的兩天，只能被迫接受這種情況嗎？

來比較下膠片和化學(xué)發(fā)光：

化學(xué)發(fā)光的動(dòng)態(tài)范圍大于3.3OD，而膠片顯影的動(dòng)態(tài)范圍僅有1.2OD，由此可以看出化學(xué)顯影優(yōu)于古老的膠片顯影。

對(duì)于那些蛋白分子量接近，化學(xué)顯影背景深的又該如何？

近紅外熒光標(biāo)記是western blot最理想工具

目前國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室使用的仍是化學(xué)發(fā)光，而SCI期刊中則有很多使用熒光標(biāo)記WB，為了緊跟時(shí)代的步伐，我們需要引進(jìn)和創(chuàng)新。那熒光標(biāo)記的好處在哪？

化學(xué)發(fā)光的信號(hào)是動(dòng)態(tài)的，二抗是酶標(biāo)記，屬于酶促動(dòng)力學(xué)反應(yīng)，信號(hào)隨時(shí)間的變化而變化，信號(hào)不與目標(biāo)蛋白濃度成線性比例關(guān)系。而熒光信號(hào)熒光是靜態(tài)信號(hào)，不會(huì)隨著時(shí)間的變化而變化，信號(hào)持久，可達(dá)到精準(zhǔn)定量。

PVDF膜或者NC膜在可見光區(qū)會(huì)產(chǎn)生自發(fā)熒光，而在近紅外區(qū)是幾乎沒有自發(fā)熒光，進(jìn)而消除了背景的干擾。選擇在近紅外區(qū)自發(fā)熒光較低的轉(zhuǎn)印膜得到的，效果更好，背景更加干凈，信噪比更高。

化學(xué)發(fā)光和熒光標(biāo)記western blot 各有所長，而Azure c600多功能分子成像系統(tǒng)兼顧化學(xué)發(fā)光的高靈敏和熒光檢測的寬動(dòng)態(tài)范圍和精準(zhǔn)定量，滿足實(shí)驗(yàn)室各種需求。

小巧的體格，卻一應(yīng)俱全，可以靈活控制多種應(yīng)用程序，包括化學(xué)發(fā)光，熒光，DNA/蛋白膠�？梢詽M足對(duì)實(shí)驗(yàn)室各種樣品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可進(jìn)行Cy3, Cy5, Cy2 多色熒光LED成像，又可在700和800nm處進(jìn)行近紅外激光定量熒光western 成像系統(tǒng)。這達(dá)到對(duì)成像最完美的要求，兼顧動(dòng)態(tài)范圍的熒光定量分析，以及高靈敏度的化學(xué)發(fā)光的定性分析。下面來看下具體的應(yīng)用。