細胞形態(tài)異常，魚骨圖來幫忙（一）

各位做實驗的時候都遇到過這種情況嗎？
當您開開心心地把養(yǎng)好的細胞拿出來
準備做后續(xù)實驗時
突然發(fā)現(xiàn)
“啊~~~，我的細胞又長跑偏了�。�！”
誰能體會實驗猿的這種心塞

那么這個時候我們就發(fā)揮出了作為一個實驗猿的耐心和決心
一定要搞清楚，到底是哪一步出現(xiàn)了問題
導致細胞形態(tài)異常
BI中國市場部為大家貼心的準備了一份禮物~
魚骨圖
（進入官網(wǎng)點擊相應骨刺即可查看相關訊息噢~）
接下來，大家跟緊小編的步伐，一起去探索魚骨圖的奧秘吧 ！

魚骨圖是一種分析問題產(chǎn)生的質量管理方法，此魚骨圖分析造成細胞形態(tài)發(fā)生異常時的幾個主要原因：
◆ 外源污染（微生物污染）
◆ 內源異常（細胞層面）
◆ 人為操作/環(huán)境
◆ 培養(yǎng)基
◆ 輔助試劑
◆ 培養(yǎng)耗材
魚骨圖可幫助研究人員厘清實驗上的問題。魚骨圖魚刺的大到小或近到遠,相應表示問題發(fā)生概率的高低。
接下來，我們將逐條分析這些污染原因，并為大家附上解決方案。（如下表格點擊貨號即可查看產(chǎn)品信息）

外源污染

外源污染主要指的是微生物污染，又可分為以下幾點：

  ✫ 真菌，酵母菌  ✫ 細菌  ✫支原體 ✫ 黑膠蟲 ✫ 病毒 ✫ 細胞交叉污染
以下幾種微生物污染，通常是肉眼可見突發(fā)式造成細胞培養(yǎng)基渾濁和變色，在可見光顯微鏡下可以觀察到真菌、酵母菌和細菌污染狀況。


01  真菌，酵母菌

---

 真菌：這類微生物外觀類似棉絮狀的漂浮物，在顯微鏡下可觀察到菌絲體，污染早期不會使培養(yǎng)基變黃。
酵母菌：顯微鏡下常見成串的珠狀物形態(tài)呈卵形，大約比細胞小5~10倍，當其進行出芽生殖時，會聚集成連體結構；爆發(fā)污染嚴重時，會造成培養(yǎng)基pH值改變，不易除去。

解決方案：

表1.產(chǎn)品列表

產(chǎn)品名稱-中文名稱 貨號 作用種類作用種類 兩性霉素B，250mg/ml 03-028-1 真菌，酵母菌和霉菌 兩性霉素B，2500mg/ml 03-029-1 制真霉素，10000units/ml 03-030-1 真菌，酵母菌和霉菌 青鏈雙抗（青霉素-鏈霉素） 03-031-1 對革蘭氏陽性菌G+，革蘭氏陰毒性G- 青鏈雙抗（青霉素-鏈霉素）10X濃縮 03-031-5 青鏈霉素，制真菌素三抗 03-032-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 青鏈霉素，兩性霉素B三抗 03-033-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 青鏈霉素，新霉素三抗 03-034-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 硫酸慶大霉素溶液，50mg/ml 03-035-1 對革蘭氏陽性菌，革蘭氏陰性菌，支原體 卡那霉素溶液，10mg/ml 03-049-1 對革蘭氏陽性菌，革蘭氏陰性菌，支原體

產(chǎn)品名稱-

02  細菌

---

細菌污染時，培養(yǎng)基在短時間內變成黃色或白色渾濁，細胞停止生長甚至死亡；有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細胞形態(tài)會變異（出現(xiàn)多角，多核狀況）、細胞不附著，顯微鏡觀察背景有大量黑點。
解決方案：（同上表格1）
Dr.Cell可提供：微生物測序檢測

03  支原體

---

支原體種類較多，常以寄生或腐生營養(yǎng)方式生長，廣泛存在于環(huán)境之中，是細胞培養(yǎng)過程常見污染，經(jīng)常來源于實驗人員（支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道）、動物源血清及胰酶、消毒不完全的器具，大小只有0.15~0.3μm，所以能通過一般標準的細胞培養(yǎng)過濾方法，0.22μm過濾膜。支原體增長速度相較于細菌比較緩慢，污染初期（輕微）培養(yǎng)基可能依然清澈不會變黃，所以輕微污染時不容易用常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)（細胞外觀觀察或是DNA染色法）確認。
支原體污染不但會緩慢改變細胞形態(tài)、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應，它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌體實驗結果偏差。
解決方案：

Biological Industies（BI）可提供：支原體檢測/處理/預防全套解決方案

表2.支原體相關產(chǎn)品列表

中文名稱 貨號 備注 支原體污染檢測試劑盒 20-700-20 高敏感性PCR反應檢測方式，明確及快捷 的確認細胞培養(yǎng)中支原體污染 支原體污染處理試劑 03-036-1 03-036和03-037需要聯(lián)合使用 03-038單獨使用，這是兩種不同的處 理支原體污染的途徑，效果也會有所不同 03-037-1 03-038-1 支原體、細菌、真菌污染預防噴霧劑 IC-110100 培養(yǎng)箱和無菌操作臺消毒試劑，可有效預防 微生物的生長和污染。其成分是可生物降解， 無毒無刺激 支原體預防試劑 01-867-1 即用型的濃縮溶液，50ml Aquaguard-1溶液 加至5L的無菌水中，每2-4周更換一次培養(yǎng)箱中水 01-916-1 添加在水浴鍋中，高效抗菌性化學化合物， 可有效殺滅革蘭氏陽性菌和陰性菌

Dr.Cell可提供：支原體污染檢測

04  黑膠蟲

---

目前科學界對黑膠蟲并無定論，認為是不明沉淀現(xiàn)象或多種未知生物污染現(xiàn)象的通稱。
在高倍率顯微鏡頭下，可觀察到各式形狀的小黑點（卵圓狀、球狀、桿狀等）、活躍的布朗運動及明顯游動現(xiàn)象，部分黑膠蟲具有細胞毒性，可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡。
解決方案：
Dr.Cell可提供：黑膠蟲樣本鑒定
目前檢測的黑膠蟲樣本，實際上62%為細菌，38%為支原體（如下圖1）

圖1
 

05  病毒

---

病毒感染可能來自宿主動物細胞或病人，病毒感染及傳播具有細胞專一性，在細胞培養(yǎng)污染物中是相對最難檢測的。然而一旦細胞遭受污染后顯微鏡下能明顯觀察到細胞碎片增多、腫大、圓縮、脫落等病態(tài)變形，嚴重時會在單層細胞上觀察到局部破損空斑。
解決方案：
可選用輻照血清以避免帶進任何活的微生物進入培養(yǎng)體系。

     
           圖2.Before infection        圖3.After 24 hours infectiond
 

06  細胞交叉污染

---

細胞株的交叉污染，曾有文獻報道統(tǒng)計，目前使用的細胞株大約有15~20%不是科學家們所認為的細胞，而在生物醫(yī)藥領域中，細胞來源和細胞株身份鑒定檢測觀念普遍缺乏。細胞株的交叉污染，常在不經(jīng)意的實驗疏失疏忽（不同細胞株分盤時，共享一瓶培養(yǎng)基、槍頭、移液管忘記更換，而造成不同細胞株之間的混合污染，或是實驗操作人員錄入錯誤細胞株名稱，繼代時的培養(yǎng)皿，冷凍細胞時的凍存管）中發(fā)生，而造成錯誤后續(xù)數(shù)據(jù)搜集；目前大部分的科學期刊都已有“細胞相關實驗論文發(fā)表前，均需附上細胞鑒定報告”的規(guī)定（可查閱：文章發(fā)表前要求提供細胞鑒定的雜志），以此保證數(shù)據(jù)來源的正確性。

目前常用的細胞身份驗證的方式包括：短串聯(lián)重復序列（STR）、同功酶分析、染色體組分型、擴增片段長度多態(tài)性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前國際細胞庫（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于細胞株身份鑒定方法。 
小編溫馨提示，至少每半年一次進行細胞鑒定，當然理想情況每2-3個月鑒定一次，且課題開展前最好先確認使用的細胞身份。
解決方案：
Dr.Cell可提供：
1. 人源細胞系STR鑒定（STR Authentication）
2. 細胞物種鑒定（Species Identification）-15種常見模式動物的鑒定
 

THE END
您在實驗中有過這些問題嘛？
最后是怎么解決的呢，歡迎大家留言吐槽噢~

好啦，本期介紹就到這里啦，后續(xù)小編會根據(jù)順序
繼續(xù)為大家分享噢~

原文鏈接