細(xì)胞如何檢測(cè)是否支原體污染

至今，共有超過(guò)180種支原體被發(fā)現(xiàn)，有超過(guò)20種能感染體外培養(yǎng)的細(xì)胞，而目前實(shí)驗(yàn)室最常見(jiàn)(95% 以上)的支原體則來(lái)自其中6種：

• 源自于實(shí)驗(yàn)人員鼻腔、口腔，并經(jīng)由飛沫傳至培養(yǎng)細(xì)胞中的口腔支原體（M.orale）、豬鼻支原體（M.fermentans）及人型支原體（M.hominis），居于首位（占總體的50%以上）。

• 其次則為大多來(lái)自牛血清的精氨酸支原體（M. Arginini）、萊氏無(wú)膽甾支原體（A. Laidlawii）、及來(lái)自豬源胰酶的豬鼻支原體（M. Hyorhinis）。
  PS：BI胰酶經(jīng)過(guò)輻照，不含活的支原體。
   

  可惡的東西支原體“麻煩精”

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  既然支原體是細(xì)菌的一種，抗生素一加不就好了嗎?  
  為什么可以搞到全球這么多細(xì)胞庫(kù)污染?

  • 支原體體積非常小, 極易通過(guò)0.22um濾膜, 且一般光學(xué)顯微鏡無(wú)法觀察到。                                      
  • 支原體能附著并存活在器物表面(操作臺(tái), 培養(yǎng)箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。                              
  • 支原體生長(zhǎng)緩慢，通常不破壞宿主細(xì)胞但默默改變了細(xì)胞生長(zhǎng)代謝，且對(duì)傳統(tǒng)抗生素具抗性，因?yàn)榭股�素大多破壞�?xì)菌細(xì)胞壁, 而支原體恰恰沒(méi)有細(xì)胞壁。                                   
  • 支原體污染初期, 培養(yǎng)基不變色, 細(xì)胞形態(tài)正常，但等大量污染時(shí), 為時(shí)已晚, 耗時(shí)又耗力。
  你說(shuō)，支原體煩不煩！
  怎知有“小三”？檢測(cè)檢測(cè)再檢測(cè)

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  目前檢測(cè)方法可大致分成四種：
  ■微生物培養(yǎng)法
  將樣品培養(yǎng)在特殊瓊脂培養(yǎng)基上，在37ºC有氧環(huán)境中孵育2周，陽(yáng)性培養(yǎng)基上會(huì)長(zhǎng)出100~400um大小的“煎蛋狀”菌落。
  ■DNA螢光染色法
  支原體DNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），容易被Hoechst 33258此熒光劑染上，被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點(diǎn)。
  ■ELISA法
  將支原體16S核糖體RNA標(biāo)上標(biāo)簽，然后用特定抗體預(yù)包被過(guò)的微孔板對(duì)標(biāo)簽進(jìn)行捕獲，再加入顯色用的抗體及底物，最后通過(guò)比色法得出檢測(cè)結(jié)果。
  ■PCR法
  原理為擴(kuò)增支原體16S核糖體RNA的基因，能檢測(cè)多達(dá)19種支原體，操作快速、準(zhǔn)確性高，市面上有多款相關(guān)產(chǎn)品可參考 (BI：EZ-PCR支原體檢測(cè)試劑盒)。
   

  看我妙招
  怎么消滅“小三”

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  消滅支原體依不同處理發(fā)法，分成四大類：
  ■物理法：高溫高壓滅菌
  ■免疫法：使用支原體特異性抗血清、裸鼠傳代法
  ■化學(xué)法：界面活性劑處理（BI：Pharmacidal 支原體噴壺）
  ■生化法：使用抗生素等藥物（BI：BIOMYC 支原體處理試劑）

  　目前，大環(huán)內(nèi)酯（Macrolides）、四環(huán)素（Tetracyclines）和喹諾酮（Quinolones）這三類抗生素，是公認(rèn)對(duì)抗支原體效果最佳的藥物，而市面上有許多針對(duì)不同菌株配置的抗生素產(chǎn)品可以參考。

  如果你的細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果為～

  　�。�無(wú)支原體污染＂

  那恭喜你啦！要好好維持！
   

  要怎么預(yù)防支原體污染?

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  培養(yǎng)良好的無(wú)菌操作實(shí)驗(yàn)習(xí)慣
  感冒咳嗽時(shí)盡量不要使用細(xì)胞房，如果必須使用，請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)后徹底清潔消毒使用空間。

  新購(gòu)產(chǎn)品檢測(cè)
  新購(gòu)買血清等動(dòng)物源產(chǎn)品、細(xì)胞株等，在使用前先做支原體檢測(cè)；或從有資質(zhì)的正規(guī)廠商購(gòu)買相關(guān)產(chǎn)品。（上海逍鵬生物-以色列BI細(xì)胞培養(yǎng)試劑）

  常規(guī)工作要落實(shí)
  定期檢測(cè)使用中的細(xì)胞，定期擦拭、清潔實(shí)驗(yàn)室環(huán)境（BI：Pharmacidal 支原體噴壺）。

  最小化抗生素使用頻率
  非珍貴細(xì)胞污染，請(qǐng)直接丟棄，避免抗生素濫用導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生