如何避免支原體污染的應(yīng)對策略詳解
培養(yǎng)細胞時，
發(fā)現(xiàn)細胞增殖變慢、
形態(tài)漸漸改變，
是血清或培養(yǎng)基的問題嗎？
很有可能是你的細胞污染了~~~~~
支 原 體 污 染
細胞污染可分為細菌、霉菌、酵母菌、支原體污染，其中支原體污染發(fā)生的概率>50%。支原體(Mycoplasma) 是最小的原核生物，約0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μm 過濾膜 （BI血清經(jīng)過3次0.1μm濾膜并且檢測支原體)。
支原體污染棘手的原因之一是沒有如其他污染源“立即可辨”的現(xiàn)象，支原體污染侵襲細胞但是并不一定致死。如果您的細胞出現(xiàn)如下狀態(tài)：增殖變慢、形態(tài)變差、培養(yǎng)液變黃但是沒有渾濁，說明您的細胞可能正遭受支原體的摧殘��！
受支原體污染的293T 正常無污染的293T
怎么知道您的細胞正遭受支原體摧殘呢，常見的檢測方法幾種：
1.分離培養(yǎng)法
將可疑樣本接種到支原體培養(yǎng)基中，觀察菌落生成。缺點:培養(yǎng)時間長，須3~5周才能判斷。
2.DNA熒光染色法
利用熒光染劑 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 檢測支原體污染，但若有些細胞易有熒光背景，可能會干擾結(jié)果判讀。
3.PCR法
利用特異性引物，經(jīng)PCR反應(yīng)檢測支原體DNA，靈敏且快速。
BI EZ-PCR支原體檢測試劑盒：采用PCR法，簡化了細胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測過程，可檢測出細胞培養(yǎng)實驗中常見的支原體污染。
試劑盒中包含獨特的反應(yīng)混合液，以及PCR中需要的所有試劑。使用者只需備有樣品，最后產(chǎn)物跑完膠后，如有一個270bp的片段，則代表有支原體污染，整個檢測過程耗時約4小時。
支原體污染處理試劑：
BIOMYC-2 Antibiotic Solution 100X，貨號：03-037-1B/C/D。
BIOMYC-1 需BIOMYC-2按先后聯(lián)合使用。
BIOMYC-3 Antibiotic Solution 100X，貨號：03-038-1B/C/D。
上述處理試劑可去除90%以上實驗室常見的支原體污染 (支原體非單一物種，無單一試劑能100%去除支原體污染)，不具細胞毒性，方法非常便捷。
俗話說，預防勝于治療，所以操作的器材與環(huán)境消毒也至關(guān)重要：
1.超凈工作臺預防
BI也提供Pharmacidal (貨號: IC-110100)作為相應(yīng)的處理試劑，Pharmacidal可有效預防真菌（和孢子），細菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。Pharmacidal成分為四苯甲基化合物，可生物降解，無毒，無刺激，對一般的工作臺和器材表面沒有任何損傷。不需稀釋，每次使用超凈工作臺前或每天噴灑一次臺面，二氧化碳培養(yǎng)箱每兩周一次噴灑消毒，噴灑后讓其自然風干，無需擦拭。
2.水盤為維持培養(yǎng)箱濕度所必需，但也成為潛在的污染源
BI的 Aquaguard-1 (貨號: 01-867-1B 100ml, 稀釋100倍使用) 消毒水盤效果非常好，而且不會腐蝕不銹鋼，無毒，不揮發(fā)。
3.其他實驗室的水浴環(huán)境也容易造成污染
BI的Aquaguard-2 (貨號: 01-916-1E 50ml, 稀釋500倍使用)，可以有效消毒任何形式的水浴環(huán)境。
Anyway，
科研路漫漫，
支原體君常相伴，
還是要做好預防和及時地檢測，
給細胞安全的成長環(huán)境
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