實(shí)驗(yàn)室微生物污染狀況及控制措施

目前, 實(shí)驗(yàn)室微生物的污染情況普遍存在, 主要是細(xì)菌、真菌和支原體等, 極易引發(fā)生物安全事件。為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和科學(xué)性, 保證實(shí)驗(yàn)室的生物安全, 控制實(shí)驗(yàn)室微生物污染已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室重要的安全管理工作。

一、實(shí)驗(yàn)室微生物污染的狀況及危害
實(shí)驗(yàn)室生物安全管理工作困難重重;細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過(guò)程中生物性污染是一個(gè)主要問(wèn)題;在食用菌的菌種培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室, 雜菌的污染是一個(gè)比較普遍存在的現(xiàn)象;在高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中, 為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性, 消滅雜菌顯得尤為重要, 如結(jié)核病的診治主要依賴(lài)于該菌的實(shí)驗(yàn)室分離和培養(yǎng), 同時(shí), 高致病性的病原微生物可能引起實(shí)驗(yàn)室工作人員的感染, 甚至造成社會(huì)人群的感染, 嚴(yán)重危害環(huán)境安全和公眾健康, 從而造成社會(huì)恐慌;在疾控部門(mén)的微生物實(shí)驗(yàn)室, 培養(yǎng)基雜菌污染現(xiàn)象極為常見(jiàn), 而培養(yǎng)基的質(zhì)量關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性、權(quán)威性;醫(yī)院檢驗(yàn)科集中了醫(yī)院送檢的人體血液、體液、排泄物、分泌物等各類(lèi)標(biāo)本, 這些標(biāo)本大多帶有致病微生物, 并且在檢驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠會(huì)污染空氣, 從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

二、實(shí)驗(yàn)室微生物污染的原因
實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境中的物理化學(xué)以及生物因素都可能是污染的原因, 其中, 以生物性污染最為常見(jiàn)。并且, 微生物的污染也是最難控制的。導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室微生物污染的原因主要有: (1) 培養(yǎng)基滅菌操作不規(guī)范; (2) 在實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中, 微生物隨著實(shí)驗(yàn)操作產(chǎn)生的氣溶膠而擴(kuò)散, 并污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境表面, 尤其是氣溶膠中的霉菌, 在空氣中附著在塵埃上, 形成一定粒徑的生物性粒子而懸浮, 直接污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境; (3) 不同人員在理解與執(zhí)行等方面還存在很大的偏差, 造成理論與實(shí)際情況的嚴(yán)重脫節(jié), 容易使實(shí)驗(yàn)室管理人員感到困惑; (4) 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出人員較多, 攜帶的微生物導(dǎo)致空氣污染。

三、控制實(shí)驗(yàn)室微生物污染的措施
根據(jù)實(shí)驗(yàn)室微生物污染的原因, 可以通過(guò)以下措施控制污染。
⒈實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)指標(biāo)應(yīng)符合消毒滅菌的標(biāo)準(zhǔn)
1) 儀器設(shè)備的安全。儀器設(shè)備的正常運(yùn)行是生物安全的重要保障, 是控制微生物污染的基本要求, 特別是冰箱、超凈工作臺(tái)、干烤箱和高壓蒸汽滅菌器等儀器設(shè)備直接影響了實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)試劑的無(wú)菌程度。
實(shí)驗(yàn)用品如培養(yǎng)皿、試管等, 按照浸泡、刷洗、沖洗、滅菌等步驟嚴(yán)格清洗。應(yīng)用高壓蒸汽滅菌的物品不能裝得過(guò)滿, 玻璃制品、金屬器械等物品先高壓蒸汽滅菌然后在干烤箱中烘干。實(shí)驗(yàn)用品滅菌后不易存放, 沒(méi)有及時(shí)使用的, 在下次實(shí)驗(yàn)前仍需重新滅菌。
2) 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的無(wú)菌化。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境微生物污染主要是空氣污染, 空氣消毒的方法很多, 化學(xué)消毒方法效果明顯, 但多數(shù)具有腐蝕性, 可持續(xù)效果差;物理消毒方法往往有其局限性;中草藥殺菌成分的研究仍需加強(qiáng)。因此, 克服單一消毒方法, 采用多方法相結(jié)合對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣進(jìn)行消毒。按時(shí)通風(fēng)換氣, 同時(shí)通過(guò)過(guò)濾設(shè)備對(duì)進(jìn)入室內(nèi)空氣中的非生物和生物粒子加以控制, 如體積小、移動(dòng)方便、操作簡(jiǎn)單的空氣凈化器, 可在有人活動(dòng)的情況下使空氣中的菌量保持較低水平�；瘜W(xué)消毒劑的種類(lèi)很多, 如甲醛, 可以消滅結(jié)核桿菌、銅綠假單胞菌噬菌體、脊髓灰質(zhì)炎病毒等, 但是對(duì)人體有一定的毒性, 使用后要及時(shí)通風(fēng);過(guò)氧乙酸、乳酸是一種廣譜殺菌劑, 過(guò)氧乙酸噴霧消毒效果良好, 但是對(duì)粘膜具有刺激性, 對(duì)金屬有腐蝕性且穩(wěn)定性不夠好;臭氧具有消毒無(wú)死角、維持時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn), 但是對(duì)人體同樣有一定危害, 需要充分的通風(fēng)降低其含量;高濃度的消毒靈可以消滅空氣中的霉菌。蒼術(shù)、艾葉、大青葉等中草藥煙熏均有不同程度的空氣滅菌作用, 但是原料價(jià)格高和煙熏的二次污染問(wèn)題還善待解決。對(duì)于要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室, 如細(xì)胞室, 還需要控制實(shí)驗(yàn)室的溫度和濕度, 保持干燥與清潔來(lái)切斷微生物傳播途徑。
實(shí)驗(yàn)室通常用1‰的新吉爾滅定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室桌面消毒, 實(shí)驗(yàn)室空氣用紫外燈消毒, 有研究證明紫外線對(duì)表皮葡萄球菌、粘質(zhì)沙雷菌、枯草芽孢桿菌繁殖體和氣溶膠殺滅率可達(dá)99。5%以上。培養(yǎng)箱內(nèi)所有可拆卸的配件經(jīng)75%乙醇擦洗后, 高壓蒸汽滅菌, 安裝之前用二次蒸餾水擦洗內(nèi)膽及配件。超凈工作臺(tái)使用前后確保紫外線照射60min, 使用時(shí)用75%乙醇認(rèn)真擦拭臺(tái)面, 經(jīng)常清掃, 被雜菌污染的培養(yǎng)物要及時(shí)運(yùn)出去處理。實(shí)驗(yàn)室的廢棄物不能視為生活垃圾處理, 如標(biāo)本、離心管、培養(yǎng)皿等需要高壓蒸汽滅菌, 棉簽、吸水紙等一次性使用的污染材料焚燒后再處理。
⒉培養(yǎng)過(guò)程中抑制雜菌生長(zhǎng)
準(zhǔn)備原料盡量做到?jīng)]有剩余, 每次實(shí)驗(yàn)都使用新的培養(yǎng)液, 如有剩余要妥善保存, 盡快使用。培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)液或培養(yǎng)基可以通過(guò)加入二性霉素25~50U/mL抑制真菌污染, 培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)液可以通過(guò)加入硫酸、漂白粉、青霉素、克菌靈等抑制雜菌污染。
⒊保持菌種的優(yōu)良
在實(shí)驗(yàn)用菌種可選的情況下, 用品質(zhì)優(yōu)良、抗污染的菌種, 定期更新菌種。優(yōu)良菌種要用適宜的方法保存, 盡量避免多次傳代導(dǎo)致的菌種退化或者菌種變異。
⒋建立完善的實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度
在運(yùn)行中不斷完善實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度, 并在醒目位置懸掛。對(duì)本實(shí)驗(yàn)室工作人員及外來(lái)人員及時(shí)培訓(xùn), 加強(qiáng)管理, 提高其生物安全管理意識(shí), 增強(qiáng)自身操作能力。盡量減少無(wú)關(guān)人員進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室, 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿滅過(guò)菌的工作服, 再用75%乙醇擦拭手部、腕部, 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)動(dòng)作輕柔, 避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的工作人員及日常養(yǎng)護(hù)人員采取培訓(xùn)、考核的制度, 組織相關(guān)人員對(duì)生物安全管理進(jìn)行交流及學(xué)習(xí)。根據(jù)需要增加實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備, 如洗眼裝置、消毒器具、生物安全柜等。

總之, 控制實(shí)驗(yàn)室微生物污染的措施很多, 單一方法必然具有局限性, 效果不佳, 尤其是細(xì)菌污染, 細(xì)菌的細(xì)胞壁成分復(fù)雜, 對(duì)消毒劑的敏感程度具有選擇性, 可以根據(jù)所操作的病原微生物進(jìn)行滅菌驗(yàn)證。不同實(shí)驗(yàn)室由于實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和微生物污染的種類(lèi)不同, 應(yīng)根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況選擇多種方法結(jié)合的控制措施。