新手養(yǎng)細(xì)胞入門級(jí)注意事項(xiàng)

1.冷凍管應(yīng)如何解凍？
取出冷凍管后，須立即放入 37 ℃ 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管的爆裂。

2.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除 DMSO？
除少數(shù)特別注明對(duì) DMSO 敏感的細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有 10~15 ml 新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附的問題。
 
3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法存活。

4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類？
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。

5.何謂 FBS，F(xiàn)CS，CS，HS？
FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 是錯(cuò)誤的使用字眼，請(qǐng)不要再使用。CS （calf serum） 則是指小牛血清。HS （ 則是指馬血清。

6.培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用 5% 或 10% CO2？或根本沒有影響？
一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為 pH 的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中 NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的 CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3 含量為每公升 3.7 g 時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用 10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3 為每公升 1.5 g 時(shí)，則應(yīng)使用 5% CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。

7.何時(shí)須更換培養(yǎng)基？培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
視細(xì)胞生長密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
一 ℃ 16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 長期儲(chǔ)存。