胍丁胺對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的干預效應及機制

胍丁胺對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的干預效應及機制

摘要：
目的：觀寮胍丁胺(AGM)對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛(ⅠNP)模型大鼠的干預效應,并探討其可能的機制。

方法：將40只雄性SD大鼠隨機分為5組各8只,除對照組外其余各組單次腹腔注射鏈脲佐菌素65mg/kg構建糖尿病模型;足底觸痛伩測量糖尿病大鼠杋械縮足閾偵(\wT)和熱縮足潛伏期(Tw),降嘔〉20%基礎閾值視為DNP大鼠模型制爺成功。ACM50組、ACM300組、GP組分別腹腔注射AGM150、300mg/kg和加巴噴丁100mg/g,對照組、模型組腹腔注射等量生理鹽水。分別于STZ注射前1d(0d),SYZ注射后7、14、21、28d,取尾靜脈血檢測血糖,爛底觸痛儀測量MWT、TWL:檢査后處死大鼠取脊髓組織,釆用 Western blotting法檢測磷酸化細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶活性。結果與對照組比較,其他各組血糖均升高,MWT降低、TW.縮短(P均<0.01)。與模型組比較,AGM150組、AGⅥ300組于STZ注射后21、28d血糖降低(P<0.05或<0.01),GP組血糖差異無統(tǒng)計學意義:AGM150組、AGM300組MwT(21、28d)升高、TW.(28d)延長(P均<0.01),GP組21、28d時MWT升高TWL延長(P<0.05或<0.01);于SIz注射后28d,模型組pERK蛋白表達量高于對照組(P<0.05),AGM450組、AGM300組、GP組大鼠脊髓pRK表達量均低于模型組(P<0.05或<0.01)。
結論：AGM具有明顯地調(diào)節(jié)血糖及鎮(zhèn)痛效應,其鎮(zhèn)痛機制可能與其對血糖的調(diào)節(jié)及抑制脊髓ERK蛋臼的活化有關
關鍵詞:糖尿病神經(jīng)病理性疼痛:胍丁胺;加巴曠丁;血糖:鎮(zhèn)痛作用;細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶∷大鼠 2.1各組大鼠血糖水平比較見表1。

2.3各組大鼠脊髓P玊RK表達比較與對照組大閾值,證明DNP大鼠模型制備成功。鼠脊髓p玊RK表達量(2460.55±10.41)比較,模型組pERK蛋白表達量(4431.22±434.78)增加的神經(jīng)遞質(zhì)/調(diào)質(zhì),參與多種疾病的病理過程,具有(P<0.05);與模型組比較,AGM150組(2422.35神經(jīng)細胞保護、鎮(zhèn)痛,促細胞增殖,預防和治療阿片±145.42)、AGM30組(3375.4±304.38)、GP組所致軀體、精神依賴和復吸等重要藥理作用,有良好(2761.19±37.71)大鼠脊髓pRK表達量均降的開發(fā)前景及應用價值。內(nèi)源性AGM可能通過激低(P<0.05或<0.01)。
 
3討論
 
DNP的發(fā)病機制十分復雜,目前尚缺乏確切的醋酸扭體實驗中,外源性給予AGM可以觀察到明病因?qū)W解釋。約87%的糖尿病患者長期承受著神顯的鎮(zhèn)痛活性。蘭忠平等采用蜜蜂毒新型炎經(jīng)病變所致的慢性疼痛,治療上主要依賴于改善患性痛模型,鞘內(nèi)同時注射AGM與嗎啡可發(fā)揮協(xié)同者血糖水平及促進外周神經(jīng)損傷的修復。由于鎮(zhèn)痛作用。坐骨神經(jīng)結扎大鼠海馬內(nèi)注射AGM(1疼痛是一種不愉快的主觀情感體驗,只能將疼痛閾值作為疼痛的評估標準。研究表明,腹腔注射SⅣZ可能與海馬σ受體調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子α(TNFα)表可引起機械痛覺過敏和觸覺異常性疼痛凹。本研達減少有關間。本研究結果表明,AGM(150、300究采用單次腹腔注射SⅣZ65mg/kg制備糖尿病大mg/kg)能顯著提高DNP大鼠的MWT、延長TWL,鼠模型,利用MWT、TWL作為疼痛指標,造模后大且AGM300mg/kg作用效果與GP相當,證明AGM鼠MWT、TWL均明顯下降,且降低幅度>20%基礎能減輕糖尿病大鼠神經(jīng)病理性疼痛。本硏究中AGM對DNP大鼠TWL的延長效果沒有MWT增高的明顯,可能與儀器探頭接觸大鼠足部肉墊有關。
 
除了對大鼠行為學上的影響,本研究發(fā)現(xiàn)AGM(150、300mg/kg)均可降低DNP大鼠血糖水平,與Moldering等的研究結論一致。Ii等研究發(fā)現(xiàn),在細胞水平上,AGM對SZ誘導的胰島β細胞損傷具有抑制作用,可能與其激活咪唑啉受體I3亞型有關。這提示AGM可能通過激活咪唑啉受體,降低血糖水平來延緩DNP進程,改善DNP癥狀。ERK家族有5個亞族,其中ERK1/2通過級聯(lián)信號將細胞外刺激傳遞至細胞核、磷酸化轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)節(jié)細胞功能,參與細胞增殖、分化、存活、死亡等神經(jīng)細胞重要功能的調(diào)控,在疼痛及痛覺過敏信號傳導過程中起重要作用。ERKl/2的磷酸化含量可反映多種刺激誘發(fā)的神經(jīng)細胞的快速變化,是一種新型神經(jīng)細胞活動的功能指標。在多種病理性疼痛模型中,均發(fā)現(xiàn)ERK信號通路參與了脊髓水平傷害性信號調(diào)節(jié)和中樞敏感化的形成"。傷害性刺激使脊髓背角或背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細胞ERK發(fā)生磷酸化,磷酸化的ERK一方面通過磷酸化神經(jīng)細胞膜離子通道或受體,調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的興奮性;另一方面激活核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)傷害性刺激引起的靶基因表達,介導疼痛及痛覺敏化信號轉(zhuǎn)導。Han等2研究發(fā)現(xiàn),在大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCⅠ)模型中,脊髓背角pERK水平顯著上調(diào);早期鞘內(nèi)注射促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制劑U0126,可有效阻斷和延遲CCⅠ誘導的機械性異常性疼痛和熱痛覺過敏。秦曉輝等研究結果表明,AGM對甲醛所致大鼠疼痛反應有明顯的鎮(zhèn)痛作用;并且,在甲醛致痛前預先給予AGM160mg/kg,能明顯抑制甲醛所致脊髓背角磷酸化ERK表達量的上調(diào)。以上研究提示,ERK信號通路可能在DNP中同樣起到了至關重要的作用。本實驗結果表明,AGM(150、300mg/kg)可降低DNP大鼠脊髓ERK磷酸化水平。這提示AGM對DNP大鼠的鎮(zhèn)痛機制可能與抑制脊髓p￡RK的激活,減少脊髓內(nèi)傷害性信號傳導有關AGM為中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所承擔的重大新藥創(chuàng)制課題在研項目,目前尚未在國內(nèi)上市,故而國內(nèi)未有相關臨床應用報道。在國外,已有研究表明高劑量硫酸胍丁胺方案(2.670g/d)可連續(xù)安全食用長達5年,且在整個研究期間未出現(xiàn)不良反應。研究表明,在膳食中添加AGM可用于緩解腰椎間盤相關神經(jīng)根病的疼痛,改善生活質(zhì)量。綜上所述,本研究基于大鼠DNP模型,揭示了AGM具有明顯地調(diào)節(jié)血糖及鎮(zhèn)痛效應,其鎮(zhèn)痛機制化有關,為其臨床應用奠定了一定的理論基礎。  
8] Li Y, Cheng KC, Asakawa A, et al. Activation of imidazoline-H3receptors ameliorates pancreatic damage []. Clin Exp Pharmacol Physiol,2015,42(9):964971
 
9] Pan B, Zhong P, Sun D, et al. Extracellular signal-regulated kinase signaling in the ventral tegmental area mediates cocaine-induced synaptic plasticity and rewarding effects [J]. JNeuro-science,20l1,31(31):1124411255 L1oJ Xu X, Chen H, Ling BY, et al. Extracellular signal-regulated protein kinase activation in spinal cord contributes to pain hypersenstivity in a mouse model of type 2 diabetes [J]. Neurosci Bull 2014,30(1):5366Lll White JP, Cibelli M, Fidalgo AR, et al. Extracellular signal-regulated kinases in pain of peripheral origin LJI. Eur J Pha 2011,650(1):817
 
[12] Han M, Huang RY, Du YM, et al. Early intervention of ERK activation in the spinal cord can block initiation of peripheral nerveinjury-induced neuropathic pain in rats []. Acta Physiologica Sinica,2011,63(2):106114
 
13]秦曉輝,吳寧,蘇瑞斌,等.胍丁胺抑制炎性疼痛誘導脊髓磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶表達上調(diào)D].中國臨床藥理學與治療學,2007,12(9):101841022
 
14] Gilad GM, Gilad VH. Long-term (5 years), high daily dosage of dietary agmatine-evidence of safety a case report [J].JMedFood,2014,17(11):12564259
 
15.Keynan O, Mirovsky Y, Dekel S, et al. Safety and efficacy of diet-ary agmatine sulfate in lumbar dise-associated radiculopathy. an open -abel, dose-escalating study followed by a randomized, doub le-blind, placebo-eontrolled trial [J]. Pain Med, 2010, 11(3)