如何做好羊水細(xì)胞原位培養(yǎng)

羊水細(xì)胞培養(yǎng)和染色體制備，
是染色體病產(chǎn)前診斷的主要手段，
But
羊水中活細(xì)胞數(shù)少，
且羊水細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要求高、
培養(yǎng)時間長、易污染、
所以羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功率一直很低
培養(yǎng)成功了，
也會遇到分裂相較少，
形態(tài)不佳的問題。

不斷改進(jìn)的培養(yǎng)技術(shù)
和質(zhì)量有保證的培養(yǎng)基
對羊水細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要
那 么
。
。
。

離心后吸去上清液

留下的細(xì)胞沉淀

6.  用1ml BioAMF-2 重新懸浮細(xì)胞塊

1ml BI羊水培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞

7.  取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標(biāo)記（包括編號，姓名等）。為便于移動和觀察，將兩個小培養(yǎng)皿放入一個90mm培養(yǎng)皿中操作。

8.  滴加0.5ml細(xì)胞懸液至每塊蓋玻片中央，用移液管尖小心攤開（注意避免流出蓋玻片外）。

接種細(xì)胞

將細(xì)胞懸液攤勻在蓋玻片上

輕輕放入培養(yǎng)箱

9.  24小時之后，給每塊蓋玻片補加1.1ml BioAMF-2。
10.  當(dāng)克隆大小、數(shù)量合適并顯示有絲分裂跡象時收獲細(xì)胞（培養(yǎng)7天后）。

滴加秋水仙素

2.  從培養(yǎng)箱中拿出培養(yǎng)皿至通風(fēng)櫥，自此實驗期間避免移動培養(yǎng)皿。

3.  吸棄或傾倒掉培養(yǎng)液（正常情況下不必?fù)?dān)心蓋玻片掉出），用吸頭沿培養(yǎng)皿內(nèi)壁緩慢加入2ml 0.48M KCl（39℃預(yù)熱）至蓋玻片上（避免吸頭直接接觸到玻片，2ml在培養(yǎng)皿內(nèi)壁相對兩個地方分兩次加入）。

傾倒培養(yǎng)基等  

沿培養(yǎng)皿內(nèi)壁加入KCl等

4.  培養(yǎng)皿加蓋，室溫（25℃左右）下孵育30min。

5.  沿培養(yǎng)皿內(nèi)壁緩慢加入加1ml新鮮、預(yù)冷的固定液（75%甲醇：25%乙酸）至培養(yǎng)皿中，加蓋，室溫下放置10min。（每天早上配制，4℃冰箱預(yù)冷，使用過程中隨時放回冰箱）

6.  吸掉或傾倒液體，緩慢加入2ml新鮮、預(yù)冷的固定劑，加蓋，室溫下放置30min。

7.  吸掉或傾倒固定劑，加入2ml新鮮、預(yù)冷的固定劑。加蓋，室溫（25℃左右）下放置10min。

8.  吸去或傾倒固定劑，放于干燥室或化學(xué)通風(fēng)櫥，保持室內(nèi)濕度50%-60%，可以通過加濕器控制環(huán)境濕度。

9.  此時需要標(biāo)記好載玻片以便染色，載玻片必須和培養(yǎng)皿相對應(yīng)；

標(biāo)記好載玻片

10.  輕輕擠壓培養(yǎng)皿，用針從培養(yǎng)皿中沿邊緣輕輕挑取蓋玻片，放在干凈吸水紙上靜置5~10min，干燥后加封片膠DPX貼于載玻片上（細(xì)胞面朝上）。注意避免蓋玻片刮擦或折斷等損壞。

輕輕擠壓培養(yǎng)皿，用針挑起蓋玻片

將蓋玻片放在吸水紙上晾干

將蓋玻片膠粘在載玻片上

11.  室溫下靜置2小時，直到DPX完全干燥。
12.  60℃烘箱中烘烤過夜。
13.  按要求進(jìn)行染色體。

以色列BI生產(chǎn)的BIOAMF（醫(yī)療器械備案號：滬浦械備20150067號）
專門針對胎兒染色體核型分析的羊水和絨毛細(xì)胞原位培養(yǎng)而研發(fā)，
BIOAMF用于封閉和開放環(huán)境培養(yǎng)，解凍即可用，完全培養(yǎng)基。

緩沖效果更佳，
適用于封閉和開放培養(yǎng)系統(tǒng)，
增加細(xì)胞分裂中期產(chǎn)量，
有絲分裂中期染色形態(tài)更佳，條帶清晰。

關(guān)注微信公眾號
可留言或私信我們

BI中國市場部：上海逍鵬生物科技有限公司
產(chǎn)品咨詢：021-58785545-8006, 18917190011
技術(shù)支持：400-820-3979

了解詳細(xì)信息可戳原文
詳情點擊:閱讀原文