促貼壁物質(zhì)和包被方法詳解
許多細(xì)胞必須添加促貼壁物質(zhì)才能貼壁生長，
促貼壁物質(zhì)一般為細(xì)胞外基質(zhì)，
如纖連蛋白、層粘連蛋白等。
不同細(xì)胞外基質(zhì)對細(xì)胞粘附的效果一樣嗎？
細(xì)胞外基質(zhì)的包被濃度是什么標(biāo)準(zhǔn)？
今天我們就來扒一扒
那些常見的促貼壁物質(zhì)和包被方法~
是支持細(xì)胞和組織生長的重要胞外基質(zhì)蛋白，其形成的胞外環(huán)境有利于多種細(xì)胞的粘附、生長、遷移和分化。I型膠原可促進(jìn)正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)染細(xì)胞的貼壁和增殖。膠原主要包括I型膠原，Ⅱ型膠原，Ⅲ型膠原，Ⅳ型膠原，Ⅴ型膠原，Ⅵ型膠原幾種。
I型膠原——最常見的膠原蛋白，促進(jìn)細(xì)胞的貼壁和增殖，用于內(nèi)皮細(xì)胞，肝細(xì)胞，肌細(xì)胞等的培養(yǎng)。
軟骨細(xì)胞對II型膠原的黏附性較好；上皮細(xì)胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好，而在I、II、III型膠原底物的培養(yǎng)板上貼壁情況較差。
膠原應(yīng)用及建議細(xì)胞基質(zhì)濃度：
纖粘連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）
一種位于細(xì)胞表面和血漿中的大分子蛋白質(zhì)，是一種主要的細(xì)胞黏附分子，在細(xì)胞纖維基質(zhì)中發(fā)揮結(jié)構(gòu)和黏附性作用。
建議以1-5ug/cm2或者 0.5-50ug/ml的濃度作為細(xì)胞基質(zhì)，但最佳濃度取決于細(xì)胞類型或研究目的、應(yīng)用方向。
BI也提供Fibronectin solution（貨號: 03-090-1），可參考如下方法包被：
(1) 19ml 無菌的PBS加1ml的纖連蛋白 (濃度50ug/ml)；
(2) 之后一個T25 (表面積25 cm2)需用2.5ml包被, 所以視使用情形分裝包被；
(3) 一個T25加2.5ml纖連蛋白溶液；
(4) 放4度至少30分鐘；
(5) 吸出纖連蛋白溶液；
(6) 用無菌的PBS潤洗一次, 即可培養(yǎng)細(xì)胞。
是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成，存在于所有上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的基底側(cè)，同時也是某些細(xì)胞與細(xì)胞間交互作用的中間媒介。層粘連蛋白有細(xì)胞及組織特異性，對于調(diào)節(jié)細(xì)胞功能具有重要作用，如：協(xié)助粘附、促進(jìn)生長、引導(dǎo)遷移、調(diào)控分化、維持表型、防止細(xì)胞凋亡等。
在哺乳動物胚胎中，Laminin-521和511是最早表達(dá)的胞外蛋白，在2-4細(xì)胞期，已經(jīng)可以檢測到。LN-111支持hPSCs高效，符合GMP標(biāo)準(zhǔn)地分化為均一的多巴胺（DA）前體細(xì)胞。相比擬胚體（EB）為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)方案，DA前體細(xì)胞的產(chǎn)量在LN-111上增加40倍以上。
層粘連蛋白，根據(jù)不同細(xì)胞系，包被濃度一般為5-20μg/ml。
BioLamina人類重組層粘連蛋白：化學(xué)成分限定，無異源動物成分。
使用1×DPBS(Ca2+/Mg2+)稀釋，并將包被溶液加入到培養(yǎng)皿中，確保包被溶液覆蓋整個培養(yǎng)皿表面，2-8℃孵育過夜或37℃孵育2小時。
屬于小分子蛋白，借由Vitronectin 受體讓細(xì)胞貼附于細(xì)胞基質(zhì)中，主要促進(jìn)細(xì)胞遷移，增加細(xì)胞貼附性、細(xì)胞分裂、細(xì)胞生長分化等，并協(xié)助細(xì)胞間的訊號傳遞。
BI重組玻璃粘連蛋白 Vitronectin ACF Human Recombinant 200 µg（05-754-0002）
使用濃度0.5mg/ml，預(yù)包被濃度：0.5µg/cm2
建議按如下濃度包被，適用于培養(yǎng)hPSC：
1.在冰上解凍重組玻連蛋白。
2.加入3ml /孔（6孔盤）NutriStem® V9 XF 培養(yǎng)基。
3.在37℃的CO2培養(yǎng)箱中放置至少30分鐘。
4.加入5-7.5µl玻連蛋白ACF到3ml NutriStem® V9 XF培養(yǎng)基中并旋轉(zhuǎn)。注意：也可以在NutriStem®V9 XF培養(yǎng)基中直接添加玻連蛋白ACF（濃度：0.25-0.375µg/cm2）。
MSC 促貼壁試劑
MSC促貼壁試劑是Biological industries產(chǎn)品，搭配MSC NutriStem XF Medium使用，效果更佳。MSC促貼壁試劑針對多種來源的hMSC（骨髓，脂肪組織和臍帶）特別開發(fā)。
特點(diǎn)：
• 無異源體系
可參考如下包被方法：
1.使用DPBS溶液，將MSC貼壁試劑稀釋100倍（1:100）。
2.加入適量的1XMSC貼壁試劑涂層培養(yǎng)皿或板；包被期間， 注意包被液不可以干掉！
3.輕輕搖動培養(yǎng)皿，確認(rèn)貼壁試劑均勻分布在培養(yǎng)皿表面后，用封口膜包裹涂層的培養(yǎng)皿。
4.在2-8℃孵育過夜；或者在CO2培養(yǎng)箱，37℃,至少孵育30分鐘。
5.接種前, 吸除貼壁試劑，再用DPBS輕輕沖洗培養(yǎng)皿，即可接種細(xì)胞。
使用MSC Attachment solution后，MSC貼壁效果：
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