間充質(zhì)干細(xì)胞MSC誘導(dǎo)分化與染色實(shí)用指南

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）具有多向分化的潛能，在體外一定條件下可以誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞。
BI  NutriStem® MSC系列擁有眾多明星產(chǎn)品，除了NutriStem® MSC無(wú)血清培養(yǎng)基，也提供MSC誘導(dǎo)分化試劑—MSCgo^TM XF Differentiation Kits。

為何選擇MSCgo^TM XF Differentiation Kits ？
不含血清，無(wú)異源，
促進(jìn)多種來(lái)源hMSC分化為
成骨、成脂細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞
分化效果更加明顯
成骨分化可短至7天。

  
  成脂分化                   成骨分化                    成軟骨分化

如何做好干細(xì)胞誘導(dǎo)分化？  

 

接種hMSC

1. 用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀釋) 預(yù)包被24孔盤(pán)，每孔加入0.5ml MSC  NutriStem® XF，接種6x10⁴ 細(xì)胞 (3x10⁴ cells/cm²)。注意：若使用其他培養(yǎng)器皿，請(qǐng)適當(dāng)調(diào)整體積。
2. 置于37°C，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

分化
1. 培養(yǎng)24h后即細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%時(shí)，將MSC NutriStem® XF 培養(yǎng)基吸除，每孔加入0.5ml分化培養(yǎng)基。
注意：若細(xì)胞融合度<80%，繼續(xù)再培養(yǎng)一天。
2. 置于37°C，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14-21天，參照以下建議的替代培養(yǎng)基。

根據(jù)hMSC類(lèi)型的替代培養(yǎng)基方法

不同來(lái)源的hMSC具有不同的多向分化潛能。例如，hMSC-AT需要較短的誘導(dǎo)期(~ 6天)，而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天誘導(dǎo)期。
注意：對(duì)于所有不同類(lèi)型的hMSC，誘導(dǎo)成脂后建議使用維持培養(yǎng)基。避免將液體直接加入到脂肪細(xì)胞上，需要非常小心移液，因?yàn)橹�肪�?xì)胞是脆弱的。

hMSC-AT:
1. 一個(gè)分化周期/維持培養(yǎng)基6-8天使用完全成脂分化培養(yǎng)基，建議每3-4天換液。
2. 成脂誘導(dǎo)完成后，用維持培養(yǎng)基MSC  NutriStem® XF(05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)3-4天。

hMSC-BM:
1. 一個(gè)分化周期/維持培養(yǎng)基8-12天使用完全成脂分化培養(yǎng)基，建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。
2. 成脂誘導(dǎo)完成后，用維持培養(yǎng)基(MSC  NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)3-4天。

hMSC-CT:

1. 至少兩個(gè)分化周期/維持培養(yǎng)基5-10天使用完全成脂分化培養(yǎng)基，建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。
2. 成脂誘導(dǎo)完成后，用維持培養(yǎng)基(MSC  NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1)替代分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)3-6天，每2-4天換液。
3. 重復(fù)培養(yǎng)周期直到觀測(cè)到成熟脂肪細(xì)胞（即脂滴的形成）。

1. 接種hMSC，3D培養(yǎng)在 96-well U-bottom培養(yǎng)板中每孔加入100μl MSC  NutriStem® XF，接種1x10⁵細(xì)胞 (30-40x10⁴ cells/cm²)。無(wú)需預(yù)包被。
注意：微量培養(yǎng)技術(shù)也是一個(gè)選擇并且可以激發(fā)球形細(xì)胞的形成：接種10μl 1x10⁴cells/ml 入板的中心（最終1x10⁵cells/well），使其貼壁2小時(shí)，然后加入培養(yǎng)基0.1ml/well。

2. 置于37°C，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在24-48小時(shí)內(nèi)會(huì)自發(fā)形成球狀體。

3. 分化：培養(yǎng)24小時(shí)后，將MSC  NutriStem® XF培養(yǎng)基吸除，每孔加入0.2ml分化培養(yǎng)基。

4. 置于37°C，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14-21天。
注意：培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，將得到更成熟的軟骨細(xì)胞（Alcian Blue染色強(qiáng)度更大）。

5. 每3-4天更換分化培養(yǎng)基（0.2ml/well）。
注意：小心不要吸入球狀體。

 

   
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