國內(nèi)與國外黑熱病檢測方法對比

間接熒光抗體試驗(IFAT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、直接凝集試驗(DAT)、間接血球凝集試驗(IHA)、對流免疫電泳(CIE)、重組抗原(rK39)試紙條、酶聯(lián)免疫印漬技術(shù)等。

國內(nèi)外一致認(rèn)為IFAT是診斷黑熱病較敏感的一種方法，李國茹等用IFAT共檢查l9例病人，其中l(wèi)0例骨位穿刺確診的現(xiàn)癥病人均為陽性(1：160～1：10 240)，5例疑似病人亦陽性(1：4～1：5 120)，經(jīng)銻劑治療后痊愈，說明IFAT 可較早發(fā)現(xiàn)病人，能及時和準(zhǔn)確地反映疫區(qū)人群中黑熱病的流行現(xiàn)狀。

而ELISA則是一種比較快速的檢測方法，王秀珍等建立的快速ELISA法，對37例臨床癥狀疑似黑熱病者，同時作骨滋穿刺和耳垂采血作快速ELISA，二者陽性符合率100%，其中3例骨穿陰性，快速ELISA陽性的病人，經(jīng)再次作骨穿和復(fù)查原骨翻片均查見利杜體。這不僅為有臨床癥狀而骨穿陰性者提供較可靠的輔助診斷．而且可用于現(xiàn)場進(jìn)行傳染源監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查。

為了檢測更加方便，一些學(xué)者研發(fā)了試紙條。2005年李國茹等通過rK39試紙條與病原學(xué)兩種診斷黑熱病方法的比較，判斷rK39試紙條檢測黑熱病的可靠性，結(jié)果顯示應(yīng)用rK39試紙條診斷黑熱病現(xiàn)癥患者的陽性檢出率可達(dá)96.07% ，與病原學(xué)方法相比，檢出率明顯提高(P<0．01)。

利用IFAT和ELISA方法檢測具有較高的臨床價值，但這兩種方法常和某些疾病存在交叉反應(yīng)，故使用上有一定的局限性。鮑勇等利用免疫印漬技術(shù)分析杜氏利什曼前鞭毛體蛋白分子量，并用其蛋白帶分別和黑熱病人血清及其他血清進(jìn)行酶聯(lián)免疫印漬試驗，結(jié)果顯示63ku的特異性和靈敏度都非常高，僅和麻風(fēng)病人有輕度交叉反應(yīng)，這證明63ku是杜氏利什曼前鞭毛體特異性抗原，該診斷方法較簡單，結(jié)果較可靠，和麻風(fēng)病人的輕度交叉反應(yīng)易從臨床上予以區(qū)別。有學(xué)者認(rèn)為39ku也是杜氏利什曼前鞭毛體特異性抗原，胡孝素等對健康人、非黑熱病病人和11例確診黑熱病病人的血清進(jìn)行不同程度的稀釋，并將表達(dá)杜氏利什曼原蟲39ku抗原的大腸埃希菌稀釋到達(dá)1：400時，全部黑熱病患者的血清均能識別重組杜氏利什曼原蟲39ku抗原，具有臨床診斷價值 。

國外黑熱病的診斷方法
尿樣直接凝集試驗、免沉淀試驗、蒸餾水試驗，醛凝試驗和尿斯銻巴明試驗、制動試驗等。以往診斷黑熱病的方法是血清直接凝集試驗和尿樣酶聯(lián)免疫吸附試驗.

在英國Islain M Z等研究中介紹它們的敏感度分別為91.0% ，93.3%，EI ISA特異度為97.3%。Islam MZ與日本Aichi醫(yī)科大學(xué)寄生蟲學(xué)教研室及其他幾個大學(xué)共同研制出一種新型的以尿樣為標(biāo)本的直接凝集試驗，結(jié)果顯示，ELISA及尿樣凝集試驗的特異度無顯著性差異，由于該法與以往的血清直接凝集試驗和尿樣酶聯(lián)免疫吸附試驗相比，在檢測條件上具有簡便易行、無創(chuàng)傷等諸多優(yōu)越性，而且省去了ELISA所需的儀器設(shè)備，因此，對于診斷黑熱病尤其是野外診斷具有非常重要的意義。

還有一種常被用于檢測黑熱病的方法是免疫沉淀法。法國學(xué)者在常有黑熱病的地中海沿岸地區(qū)廣泛應(yīng)用其對人和犬的進(jìn)行調(diào)查，根據(jù)其研究，在確診為黑熱病的病例中，呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)的陽性率為64%～95%。醛凝試驗也是一種簡單快速的診斷黑熱病的方法，其方法是在病人的1mL血清內(nèi)加1滴乙醛福爾馬林，在幾分鐘內(nèi)出現(xiàn)的白膠狀物就算是陽性反應(yīng)。在疾病治愈后陽性反應(yīng)就消失，而消失的原因與球蛋白滴定度的降低有密切的關(guān)系。這種試驗為非特異性或弱特異性，因為由其他原因所引起的高丙種球蛋白貧血病也常出現(xiàn)陽性反應(yīng)，因此不建議使用該方法診斷黑熱病。

國外還曾有人研究應(yīng)用制動試驗檢測黑熱病，有學(xué)者曾報告在皮膚利什曼病人的血清中含有制動抗體。但是，這個報告值得懷疑，因為在他們的試驗中曾加入一種補(bǔ)體，而這種補(bǔ)體的一個組成部分很可能就是正常血清中的一種使利什曼原蟲前鞭毛體不動的熱不穩(wěn)定因素。所以這種試驗在目前還沒有被廣泛應(yīng)用。

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