葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒說明書

測定意義
GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生H₂O₂ ，是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理
GOD催化產(chǎn)生H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時催化H₂O₂分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。
試驗中所需的儀器和設(shè)備
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體8mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體2mL×1 支，4℃保存；
樣品測定的準備
組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
血清（漿）：直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計預熱 30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、GOD檢測工作液的配制：用時將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混勻，待用；用不完的試劑 4℃可保存一周；
3、測定前將 GOD 檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min 以上。
4、在1mL玻璃比色皿中加入 40μL 樣本和 960μL 工作液，立即混勻并計時，記錄 500nm下20s吸光值A(chǔ)1和1min20s 后的吸光值 A2。計算 ΔA＝A2-A1。
GOD 活力單位的計算
1、血清（漿）GOD 活力的計算
單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=3333×ΔA
2、動物組織 GOD 活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T
=3333×ΔA÷Cpr
 
 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒說明書
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/ g鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T
=3333×ΔA÷W
V 反總：反應體系總體積，1×10^-3 L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.04 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。