如何在Western Blot中選擇一抗

說到免疫印跡最重要的就是抗體的選擇了。在免疫印跡中我們會用到一抗和二抗等抗體，本文著重給大家介紹一下一抗的選擇。
一抗就是能和特異性抗原特異性結(jié)合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體�？贵w因其種屬來源不同可以分為多種類型，如鼠抗，兔抗，羊抗等等，那么在使用時我們應該怎么選擇呢？
檢測任何一種目的蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為了在試驗過程中盡快找到最適合的抗體，往往需要考慮以下幾種因素：
1.確定自己的實驗類型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗體說明書上都會給出該抗體適用于哪一種分析類型。
2. 單克隆or多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但極易出現(xiàn)非特異性條帶。
3.確定自己的實驗樣本的結(jié)構(gòu)信息。不同的抗體是由不同的免疫原（全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體或細胞等）免疫宿主而制備得來，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果檢測的樣本是蛋白片斷或蛋白全長的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段結(jié)構(gòu)域的免疫原制備出的抗體。還有一點就是樣本的制備過程，有些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，比如將樣本還原和變性等，還有一些抗體僅識別天然折疊狀態(tài)的蛋白。
4.抗體信息的確認。這一點雖然不是技術方面的限制因素，但對于結(jié)果還是會有很大影響的。當我們拿到抗體時，一定要仔細確定抗體的名字，別名、亞型等信息，千萬不要因為這些小細節(jié)導致我們的實驗毀于一旦。
當然選擇了正確的抗體之后，要想有高質(zhì)量，滿足期刊雜志發(fā)表的圖片，還需要有高品質(zhì)的成像儀來保駕護航。美國Azure多功能分子成像系統(tǒng)，全新升級，為您的實驗護航。