豌豆胰蛋白酶抑制因子(STI)ELISA試劑盒說明書

豌豆胰蛋白酶抑制因子(STI)ELISA試劑盒
適用于檢測人動植物組織勻漿、細(xì)胞上清、血清、血漿、尿液或其他相關(guān)生物液體中濃度。
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被抗體的微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒規(guī)格及配置  
 

名稱	96孔配置	48孔配置
微孔酶標(biāo)板	12孔×8條	12孔×4條
標(biāo)準(zhǔn)品	0.3mL*6管	0.3mL*6管
樣本稀釋液	6mL	3mL
檢測抗體-HRP	10mL	5mL
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL
底物A	6mL	3mL
底物B	6mL	3mL
終止液	6mL	3mL
封板膜	2張	2張
說明書	1份	1份
自封袋	1個	1個

自備物品
①.酶標(biāo)儀（450nm）
②.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
③.37℃恒溫箱
操作步驟
①．從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
②．設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
③．樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
④．除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
⑤．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次   （也可用洗板機(jī)洗板）。
⑥．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
⑦．每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。