細(xì)胞活性檢測(cè)的多種方法應(yīng)用

做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的親們，經(jīng)常需要對(duì)細(xì)胞的活性進(jìn)行驗(yàn)證，如何知道自己研究的細(xì)胞是否還活著，活性怎么樣? PCR、抗體IHC染色等細(xì)胞分析方法進(jìn)行活性檢測(cè)，由于只能反映某個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞行為而具有局限性。當(dāng)傳統(tǒng)細(xì)胞分析方法無法獲得預(yù)期結(jié)果時(shí)，使用實(shí)時(shí)細(xì)胞分析方法通常會(huì)得到很多新的生物學(xué)發(fā)現(xiàn)，因此活細(xì)胞分析技術(shù)在科研過程中發(fā)揮著越來越關(guān)鍵的作用。今天小艾來為您介紹一下我們常用的分析細(xì)胞活性的方法。

實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞活性檢測(cè)的常用方法有（包括活性檢測(cè)和增殖檢測(cè)）： 

化學(xué)發(fā)光法細(xì)胞活性檢測(cè)

熒光染料細(xì)胞活性檢測(cè)

細(xì)胞代謝檢測(cè)

細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)（臺(tái)盼藍(lán)）

DNA合成增殖

化學(xué)發(fā)光法細(xì)胞活性檢：

腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate）是由腺嘌呤、核糖和3個(gè)磷酸基團(tuán)連接而成，水解時(shí)釋放出能量較多，是生物體內(nèi)最直接的能量來源。ATP發(fā)光法，是通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP含量來分析細(xì)胞活性及增殖的。常見的ATP發(fā)光法是利用外源螢火蟲熒光素/熒光素酶與細(xì)胞內(nèi)的ATP發(fā)生氧化反應(yīng)而產(chǎn)生光子，通過監(jiān)測(cè)光度來檢測(cè)ATP含量，從而分析細(xì)胞活性與增殖。

原理圖：

優(yōu)點(diǎn)：靈敏、快速、便捷、穩(wěn)定，同時(shí)可以把ATP數(shù)量化，用相對(duì)光強(qiáng)度（RLU）來進(jìn)行定量。

熒光染料細(xì)胞活性檢測(cè)

在所有現(xiàn)有的熒光染料中，熒光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（如CFSE）是非熒光分子，其擴(kuò)散到細(xì)胞中并被細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光。熒光產(chǎn)物僅在具有完整細(xì)胞膜和活性酯酶活性的細(xì)胞中產(chǎn)生和積累,熒光產(chǎn)物會(huì)跟隨細(xì)胞分裂，被平均分配到子細(xì)胞中。進(jìn)一步可用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞分裂增殖的情況，還可以通過細(xì)胞完整性對(duì)活死細(xì)胞分別進(jìn)行標(biāo)記。

優(yōu)點(diǎn)：活體標(biāo)記、簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、熒光時(shí)間長(zhǎng)

細(xì)胞代謝檢測(cè)

CCK-8檢測(cè)是一種基于 SST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)。其主要成分為水溶性四唑鹽 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，SST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜。SST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

優(yōu)點(diǎn)：

1.CCK-8法產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，不僅省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。.MTT實(shí)驗(yàn)生成的甲臜不是水溶性的，需要使用 DMSO 等有機(jī)溶劑溶解。

2.線性范圍更寬，靈敏度更高。

3.對(duì)細(xì)胞無毒性，可以多次測(cè)定，選取最佳測(cè)定時(shí)間。

4.所用試劑在培養(yǎng)基中比 MTT 更加穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好。

5.MTT 具有毒性，同時(shí)其生成的甲臜需要有機(jī)溶劑溶解，會(huì)對(duì)操作人員身體造成危害。

細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)

臺(tái)盼藍(lán)染料是一種重要的染色劑，可以將死組織或死細(xì)胞染成藍(lán)色而具有完整細(xì)胞膜的活細(xì)胞或組織卻不著色。 由于細(xì)胞在通過膜的化合物中具有很高的選擇性，因此在活細(xì)胞中，臺(tái)盼藍(lán)不被吸收; 然而，它可以穿過死細(xì)胞中的膜。 因此，死細(xì)胞在顯微鏡下顯示為獨(dú)特的藍(lán)色。

優(yōu)點(diǎn)：用于辨別區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞，以及檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性。

DNA合成增殖

BrdU是胸腺嘧啶的衍生物，常用于標(biāo)記活細(xì)胞中新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶選擇性整合到復(fù)制細(xì)胞中新合成的DNA中（細(xì)胞周期S期）這種摻入可以穩(wěn)定存在，隨著DNA復(fù)制進(jìn)入子細(xì)胞中，BrdU的特異性抗原可以用于檢測(cè)BrdU的摻入，從而判斷細(xì)胞的增殖能力。

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