數(shù)字PCR-外泌體相關(guān)腫瘤分子標(biāo)志物篩查

近幾年外泌體研究的熱度以及文章數(shù)量一直居高不下。人體幾乎所有類型的細(xì)胞都能分泌外泌體，它是一種直徑為 30～150 nm 的小囊泡，外泌體廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶多種蛋白質(zhì)、RNA成分（編碼RNA、非編碼RNA）和脂類物質(zhì)等。外泌體作為重要的傳遞信號分子，形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，參與免疫應(yīng)答、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲、促血管新生等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。 目前，越來越多的研究人員將外泌體與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)聯(lián)系起來，特別是在液體活檢方面，外泌體的研究將會為疾病的診斷與治療帶來重大改變。
由于外泌體的來源、結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物等特性，研究人員可以從體液中獲取外泌體作為早期疾病診斷的依據(jù)以及評估藥物治療效果。外泌體用于液體活檢具有很大優(yōu)勢，一方面，外泌體比CTC或循環(huán)cfDNA能更早診斷出癌癥，CTC和cfDNA只有在癌癥發(fā)展到一定程度后才增多。另一方面，外泌體檢測還避免了傳統(tǒng)組織活檢對患者造成的不適及損傷。此外，幾乎所有體液均可作為活檢的生物材料，因此能夠保證外泌體來源。針對各種疾病的早期診斷方法將也有望投入實(shí)際應(yīng)用。
   
在一些分析中，研究人員發(fā)現(xiàn)，檢測體液中的外泌體，能鑒別出實(shí)體瘤特異的蛋白靶點(diǎn)，血清中的外泌體也帶有膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)的miRNA和mRNA突變。此外，通過分析外泌體miRNA，研究人員找到了肝癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌等等一系列疾病的標(biāo)志物，如下圖所示。
  外泌體miRNA-1247-3p促進(jìn)肝癌肺轉(zhuǎn)移
（Tumor-derived exosomal miR-1247-3p induces cancer-associated fibroblast activation to foster lung metastasis of liver cancer www. Nature communications）。 肺癌相關(guān)外泌體miRNA參與癌癥期間免疫系統(tǒng)的調(diào)控
（The Potential Biomarkers and Immunological Effects of Tumor-Derived Exosomes in Lung Cancer. Front. Immunol.）
 
在外泌體中尋找腫瘤分子標(biāo)志物，通常的研究思路如下：
      在對篩選得到的差異分子進(jìn)行再次驗(yàn)證時(shí)，數(shù)字PCR憑借其一系列優(yōu)勢獲得了廣泛的認(rèn)可。
數(shù)字PCR可以提供比qPCR更精準(zhǔn)的核酸定量，直接讀取陽性信號，通過泊松分布校正得到目標(biāo)基因的絕對拷貝數(shù)。并具有檢測周期短，靈敏度和精確度高等特點(diǎn)。該技術(shù)是目前最適合用于體液樣品（如血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、腦脊液等）中痕量核酸標(biāo)記物檢測的方法，數(shù)字PCR能夠有效對二代測序等實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
法國Stilla Technologies公司的Naica 數(shù)字PCR技術(shù)通過將一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)分配到大量微小的反應(yīng)器中，在每個(gè)微反應(yīng)器中實(shí)現(xiàn)單分子模板PCR擴(kuò)增，最后通過陽性反應(yīng)器的數(shù)目“數(shù)出”目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。并且是首款可以進(jìn)行三色熒光通道檢測的儀器，尤其是對于一些量少、比較珍貴的樣品來說，Naica全自動(dòng)微滴芯片式數(shù)字PCR平臺是您的不二之選！ 產(chǎn)品優(yōu)勢

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