小鼠模型B-hTNFA/hIL17A與銀屑病的治療新途徑

咣咣咣...各位看官晚上好呀，真是好久沒有灌輸營養(yǎng)知識啦，小編甚是想念這個步調(diào)，想必大家也是很希望自己的2020年碩果累累，猜猜看今天小編帶來什么樣的驚喜呢，那就是B-hTNFA/hIL17A 小鼠。

建立B-hTNFA/hIL17A小鼠模型，有助于推進(jìn)以TNF-α和 IL-17A為治療靶點的抗體新藥開發(fā)，這將可能成為治療銀屑病的新途徑呢，那就一起去看看吧~

 

基本信息

 

基因功能簡介

 

TNF基因編碼一種多功能促炎細(xì)胞因子——TNFα，屬于腫瘤壞死因子 (TNF) 超家族，可由CD4⁺淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞等多種類型細(xì)胞產(chǎn)生，但主要由活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。腫瘤壞死因子 (TNF) 超家族是含有 TNF 同源結(jié)構(gòu)域并形成三聚體的 Ⅱ 型跨膜蛋白的蛋白超家族。該超家族成員可通過細(xì)胞外蛋白水解裂解從細(xì)胞膜上釋放出來，并作為細(xì)胞因子發(fā)揮作用。這些蛋白主要由免疫細(xì)胞表達(dá)，它們調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能，包括免疫應(yīng)答和炎癥，但也包括增殖、分化、凋亡和胚胎形成。TNF產(chǎn)生的失調(diào)與多種人類疾病有關(guān)，包括阿爾茨海默氏病、癌癥、重度抑郁癥、銀屑病和炎癥性腸病。

IL17A基因編碼的蛋白是由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生的促炎性細(xì)胞因子，是IL-17家族的創(chuàng)始成員。IL17A可以調(diào)節(jié) NF-κB 和絲裂原活化蛋白激酶的活性，刺激 IL6 和環(huán)氧合酶-2 (PTGS2/COX-2) 的表達(dá)，以及增強(qiáng)一氧化氮 (NO) 的產(chǎn)生。高水平的IL17A與幾種慢性炎癥性疾病有關(guān)，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、銀屑病和多發(fā)性硬化癥。

研究發(fā)現(xiàn)，IL-17和TNF-α在銀屑病皮損中表達(dá)呈正相關(guān)，表達(dá)位置也基本一致，提示二者在其發(fā)病中具有協(xié)同促進(jìn)作用， IL-17可能促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌TNF-α，促進(jìn)局部血管形成，加速表皮增殖，加重局部炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致病程遷延慢性化^[1]。 

 

TNF信號通路

IL-17A信號通路

B-hTNFA/hIL17A小鼠蛋白表達(dá)分析

通過ELISA方法對B-hTNFA/hIL17A純合小鼠中TNFα蛋白表達(dá)進(jìn)行分析

 

收集體內(nèi) LPS 刺激的野生型C57BL/6和 B-hTNFA/hIL17A (H/H) 純合小鼠血清，用種屬特異性 TNFα ELISA 試劑盒進(jìn)行 ELISA 分析。

結(jié)果表明：在野生型C57BL/6小鼠中可檢測到小鼠TNFα；人TNFα 僅在B-hTNFA/hIL17A純合小鼠中可檢測到，但在 WT 小鼠中未檢測到。

 

B-hTNFA/hIL17A小鼠蛋白表達(dá)分析

通過ELISA方法對B-hTNFA/hIL17A純合小鼠中IL17A蛋白表達(dá)進(jìn)行分析

 

收集體內(nèi) LPS 刺激的野生型C57BL/6和 B-hTNFA/hIL17A (H/H) 純合小鼠血清，用種屬特異性 IL17A ELISA 試劑盒進(jìn)行 ELISA 分析。

結(jié)果表明：在野生型C57BL/6小鼠中可檢測到小鼠IL17A；人IL-17A僅在B-hTNFA/hIL17A純合小鼠中可檢測到，但在 WT 小鼠中未檢測到。

 

表型分析

 

B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白細(xì)胞亞群分析

通過流式細(xì)胞術(shù)測試白細(xì)胞亞群的比例

 

從C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)測試白細(xì)胞亞群的比例。

結(jié)果表明：純合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影響T、B、NK、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、DC和巨噬細(xì)胞的分化。

 

B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白細(xì)胞亞群分析

通過流式細(xì)胞術(shù)測試T細(xì)胞亞群的比例

 

從C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)測試T細(xì)胞亞群的比例。

結(jié)果表明：純合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影響CD45細(xì)胞中mCD4、mCD8以及T細(xì)胞中mCD4、mCD8的分化。

 

B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白細(xì)胞亞群分析

通過流式細(xì)胞術(shù)測試白細(xì)胞亞群的比例

 

從C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分離出淋巴結(jié)細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)測試白細(xì)胞亞群的比例。

結(jié)果表明：純合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影響T、B和NK細(xì)胞的分化。

B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白細(xì)胞亞群分析

 

通過流式細(xì)胞術(shù)測試T細(xì)胞亞群的比例

 

從C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分離出淋巴結(jié)細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)測試T細(xì)胞亞群的比例。

結(jié)果表明：純合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影響CD45細(xì)胞中mCD4、mCD8以及T細(xì)胞中mCD4、mCD8的分化。

 

參考資料

 

[1] 王娟, 鮑海平. 尋常型銀屑病皮損中IL-17和TNF-α的表達(dá)[J]. 山西大同大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2018, 34(06):53-55.

[2] MacEwan DJ. TNF ligands and receptors – a matter of life and death. Br J Pharmacol. 2002 Feb;135(4):855-75. DOI: 10.1038/sj.bjp.0704549.

[3] Sarah L. Gaffen, IL-17 family cytokines mediated signaling in the pathogenesis of inflammatory diseases.Cell Signal.2013Dec;25(12):2335-47. doi: 10.1016/j.cellsig.2013.07.021. 

 

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