樂楓純水為您解讀實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)用水

文章要點(diǎn)：上海樂楓市場(chǎng)部對(duì)目前疫情防控工作中的熒光定量PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)做了深入淺出地闡述，并為該實(shí)驗(yàn)中使用的純水設(shè)備做了解析和介紹。

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目前疫情的防控工作取得了階段性的成效，基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)在新冠病毒快速鑒定及確診中發(fā)揮了重要作用。
 

什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR？
 

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技術(shù)，簡(jiǎn)稱qPCR,是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)（熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針），利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 

與普通PCR相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍。運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)，可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、絕對(duì)定量和定性分析。

實(shí)驗(yàn)流程：

在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，可以分為樣本采集，RNA提取，RNA質(zhì)量鑒定，反轉(zhuǎn)錄及數(shù)據(jù)分析幾個(gè)步驟，在進(jìn)行引物、模板的稀釋，試劑的配制和補(bǔ)足反應(yīng)體系時(shí)都會(huì)用到水，水質(zhì)量的好壞直接影響最終數(shù)據(jù)分析的結(jié)果。
 

水中的顆粒物，離子含量，有機(jī)物及細(xì)菌微生物等雜質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)都會(huì)帶來影響，最值得關(guān)注的因素有以下兩個(gè)方面：
 

DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR時(shí)，去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關(guān)鍵。尤其在提取RNA的時(shí)候，RNA極易被降解。這是因?yàn)镽Nase非常穩(wěn)定，且無處不在，用常規(guī)的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase完全失活。如果樣本中的核酸被降解，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，甚至造成假陰性檢測(cè)結(jié)果。

因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量，減少對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。
 

實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)需要根據(jù)不同的引物對(duì)和模板確定最佳的鎂離子濃度。

Mg2+濃度過低，會(huì)影響DNA聚合酶的活性，導(dǎo)致產(chǎn)量降低，影響實(shí)時(shí)定量的敏感性；

Mg2+濃度過高，會(huì)增加引物二聚體的形成，這會(huì)影響特異性。

因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)用超純水必須控制Mg2+濃度，避免背景因素帶來的不確定性。

 

綜上，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)推薦使用超純水，水質(zhì)要求如下圖所示：
 

 

純水儀器選型推薦：
 

根據(jù)上述的分析和用水指標(biāo)，可以采用樂楓的Genie G一體超純水機(jī)和Genie PURIST超純水機(jī)，這兩種純水設(shè)備都可以滿足實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)的用水要求。
 

南科大安裝的 Genie G
 

GenieG和Genie PURIST純水設(shè)備是上海樂楓RephiLe為e 時(shí)代的實(shí)驗(yàn)室純水需求開發(fā)的智能型實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)。
采用了無線技術(shù)，主機(jī)、主控屏和手柄之間采用無線連接，按需隨意放置。
耗材/ 零部件實(shí)現(xiàn)了可全程追溯，全方位監(jiān)控的要求，防水的控制屏可帶手套操作。
Genie純水儀設(shè)計(jì)緊湊，體積小，可掛墻，可置于臺(tái)盆下，方便用戶合理利用空間。

其中，GenieG采用了EDI模塊，可從自來水制備超純水和EDI純水，為實(shí)驗(yàn)不同需要帶來方便。Genie PURIST則是從純水制備超純水的一款儀器，安裝使用非常方便。

 

 Genie系列超純水機(jī)，可以配置樂楓RephiLe獨(dú)創(chuàng)配方填料的低鎂型純化柱，不但可以廣譜去除水中的金屬離子，還可以特異性去除水中的鎂離子，保證超純水中Mg2+對(duì)qPCR實(shí)驗(yàn)零干擾。這種低鎂型純化柱是樂楓獨(dú)家提供，專為PCR和測(cè)序?qū)嶒?yàn)研究開發(fā)的產(chǎn)品。

 裝有帶電荷尼龍膜的RephiBio終端濾器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶，避免核酸酶對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。

中科大安裝的 Genie PURIST
 

Genie系列純水機(jī)水質(zhì)穩(wěn)定，品質(zhì)高，而且有數(shù)據(jù)保證：水質(zhì)已經(jīng)通過第三方省級(jí)以上檢測(cè)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)；RephiBio終端過濾器，也具有國(guó)外實(shí)驗(yàn)室熱源、DNase和RNase的檢測(cè)報(bào)告。使用Genie系列超純水機(jī)，可以確保超純水對(duì)qPCR反應(yīng)的不確定性降至最低，讓用戶“用水無憂”，享受高端的體驗(yàn)。

 

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上海樂楓生物科技有限公司

上海樂楓(Rephile Bioscience，Ltd.) 是一家專業(yè)從事高端水純化和實(shí)驗(yàn)室分離純化產(chǎn)品研發(fā)、設(shè)計(jì)和制造的企業(yè)，為高科技生物技術(shù)和生命科學(xué)領(lǐng)域的用戶服務(wù)。樂楓公司著眼于全球發(fā)展，在中國(guó)、美國(guó)、法國(guó)、印度、南非等近20個(gè)國(guó)家建立了銷售機(jī)構(gòu)，同時(shí)也為國(guó)際大型公司提供OEM和ODM，產(chǎn)品銷往包括歐美的近100個(gè)國(guó)家。成立十余年，樂楓持續(xù)投入研發(fā)，創(chuàng)立出了自己的產(chǎn)品品牌RephiLe（瑞楓），推出了多個(gè)新概念產(chǎn)品- 無線連接的Genie系列純水系統(tǒng)和智能型大流量純水工作站Super-Genie等。目前樂楓純化柱填料配方齊全，也提供多款密理博純水系統(tǒng)的兼容耗材。

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