微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù)在檢測新冠病毒的應(yīng)用

國家衛(wèi)健委發(fā)布了《新型冠狀病毒肺炎防控方案（第五版）》，其中在實驗室檢測技術(shù)指南中明確提出，核酸檢測結(jié)果陰性不能排除新型冠狀病毒感染。3月4日，國家衛(wèi)健委發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》 中提到了以下兩點：對疑似病例要盡可能采取包括快速抗原檢測和多重PCR核酸檢測等方法對呼吸道病原體進(jìn)行檢測。在傳播途徑中提到：“在相對封閉的環(huán)境中長時間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在傳播的可能”。

目前檢測困難：
 

從感染到治愈，至少需3次使用PCR檢測：疑似篩查、確診、治愈。針對2019-nCoV病毒的檢測相關(guān)技術(shù)已成為應(yīng)對疫情的緊急。
在《中華醫(yī)學(xué)雜志》2020年2月11日刊登的《新型冠狀病毒肺炎病毒核酸檢測專家共識》在判斷條件中提出：“當(dāng)報告為"可疑"時，實驗室應(yīng)考慮以下措施：（1）更換不同廠家的試劑盒重復(fù)實驗或采用敏感度更高的方法，如數(shù)字PCR方法進(jìn)一步確定；（2）建議臨床重新采集標(biāo)本或更換部位采集標(biāo)本再次檢測。”
 

Naica微滴芯片式數(shù)字PCR針對新冠病毒檢測解決方案
（僅供科研使用）

基于Naica自動化微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)和三通道探針法新冠病毒檢測試劑盒，高特異性，高靈敏度且全封閉過程確保安全性。

通過一步法反轉(zhuǎn)錄-數(shù)字PCR-探針方法，只需加入RNA模板，即可實現(xiàn)高特異性、高靈敏度、全封閉的新冠病毒RNA定性檢測和絕對定量。在一個樣本管中同時檢測新冠病毒的開放讀碼框1ab（ORF1ab）、核殼蛋白（N）基因區(qū)域和人內(nèi)源質(zhì)控基因。
 

新型冠狀病毒2019-nCoV一步法核酸檢測試劑盒（數(shù)字PCR法）

應(yīng)用

1、用于有接觸史尚無癥狀者排查，檢測病毒攜帶狀況；

2、 用于熒光PCR的Ct值在37-40之間的可疑樣本的核酸精準(zhǔn)檢測。

3、 用于新型冠狀病毒感染患者病毒載量動態(tài)觀察：基于數(shù)字PCR的絕對定量能力，提供更為準(zhǔn)確的病原體載量。

4、可用于治愈后患者體內(nèi)病原體核酸檢測。

5、 標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的制備：數(shù)字PCR是制備標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)定量的重要方法，為熒光PCR試劑盒提供可靠的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

優(yōu)勢

1、采用創(chuàng)新的一步法逆轉(zhuǎn)錄數(shù)字PCR檢測試劑盒，可將逆轉(zhuǎn)錄及數(shù)字PCR擴(kuò)增整合到一個反應(yīng)，實現(xiàn)單反應(yīng)三重的檢測，可同時檢測2019-nCoV新冠病毒兩個靶基因和人源內(nèi)參基因，監(jiān)控上樣同時也消除病毒變異帶來的風(fēng)險。
2、試劑盒里含有陰性質(zhì)控樣本和陽性質(zhì)控樣本，可以對實驗過程和核酸樣本進(jìn)行質(zhì)控。
3、能夠從大量背景和干擾信號中檢測到病原體核酸，檢測靈敏度較普通熒光PCR可提高1-2個數(shù)量級，最低檢測可實現(xiàn)單拷貝檢測。
4、可搭配Naica微滴芯片數(shù)字PCR使用，獨立反應(yīng)芯片設(shè)計，不易產(chǎn)生交叉污染，也避免了氣溶膠的污染。
5、操作簡易，核酸提取完成后只需要一步加樣就可完成所有人為操作，其他操作由儀器自動來完成。
6、檢測迅速，核酸提取完成后，檢測流程約2.5h即可完成。
7、根據(jù)《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗檢測技術(shù)指南（第二版）》，本指南中的核酸檢測方法主要針對新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框1a/b（open reading frame 1ab，ORF1ab）、核殼蛋白（nucleocapsid protein，N），同時增加人源內(nèi)參基因的檢測。