免疫治療新靶點(diǎn)-TNFR2

在這個(gè)草長(zhǎng)鶯飛的春天，是否記得那句“要想富，多栽樹”的宣傳標(biāo)語？今天的植樹節(jié)，百奧賽圖知識(shí)拓展課堂攜智慧樹如期而至，與您攜手探尋TNFR2。
 

基本信息
 

基因功能簡(jiǎn)介
 

TNFRSF1B（TNF receptor superfamily member 1b） 為TNF受體超家族成員, 也稱為TNFR2，主要表達(dá)在腫瘤微環(huán)境中的Treg細(xì)胞和多種腫瘤細(xì)胞中（如卵巢癌和腸癌）。其配體TNF主要識(shí)別TNFR1進(jìn)行凋亡，依賴TNFR2進(jìn)行與T細(xì)胞存活相關(guān)的功能——通過NF-κB信號(hào)促進(jìn)pro-survival基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖和生存。許多實(shí)驗(yàn)表明阻斷型抗體可以特異性殺傷腫瘤微環(huán)境中的Treg細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，用于治療多種腫瘤；而激活型抗體可以激活Treg細(xì)胞，進(jìn)而抑制Teff細(xì)胞，從而治療自身免疫疾病，為免疫治療提供了新的靶點(diǎn)。
 

信號(hào)通路
 

TNFR1和TNFR2介導(dǎo)了不同的信號(hào)和作用^[1]

 表型分析
 

B-hTNFR2小鼠mRNA表達(dá)分析
 

 

通過RT-PCR對(duì)WT和B-hTNFR2小鼠中TNFR2基因表達(dá)進(jìn)行品系特異性分析。在C57BL/6小鼠中可檢測(cè)到mTNFR2 mRNA，而hTNFR2 mRNA僅在B-hTNFR2純合鼠中檢測(cè)到。

 

采用RT-qPCR對(duì)WT和B-hTNFR2小鼠的TNFR2基因表達(dá)進(jìn)行品系特異性分析。
 

B-hTNFR2純合鼠中hTNFR2的mRNA表達(dá)與野生鼠C57BL/6相似，說明用B-hTNFR2小鼠人源化小鼠模型并沒有改變TNFR2蛋白的表達(dá)水平。

 

B-hTNFR2小鼠蛋白表達(dá)分析



 

通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠B細(xì)胞表面檢測(cè)到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠B細(xì)胞表面檢測(cè)到hTNFR2。
 

 

通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠T細(xì)胞表面檢測(cè)到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠T細(xì)胞表面檢測(cè)到hTNFR2。

 

 

通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠Treg細(xì)胞表面檢測(cè)到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠Treg細(xì)胞表面檢測(cè)到hTNFR2。

 

B-hTNFR2小鼠的白細(xì)胞亞群分析
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。

結(jié)果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響T，B，NK，粒細(xì)胞，單核細(xì)胞，DC和巨噬細(xì)胞的分化。
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。結(jié)果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響CD45細(xì)胞中mCD4、mCD8以及T細(xì)胞中mCD4、mCD8的分化。
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出淋巴結(jié)細(xì)胞。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。結(jié)果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響T，B，NK細(xì)胞的分化。
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出淋巴結(jié)細(xì)胞。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。結(jié)果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響CD45細(xì)胞中mCD4、mCD8以及T細(xì)胞中mCD4、mCD8的分化。

 

TNFR2抗體與B-hTNFR2純合鼠T細(xì)胞結(jié)合分析
 

 

從B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試TNFR2抗體與脾細(xì)胞的結(jié)合。
 

從anti-mCD3ε(0.2或1μg/mL)和anti-mCD28(1μg/mL)體內(nèi)刺激的B-hTNFR2小鼠分離出脾細(xì)胞。單個(gè)活細(xì)胞用CD45圈門后用于進(jìn)一步的分析。如圖所示，與同型對(duì)照抗體(hIgG)相比，hTNFR2 Ab2與B-hTNFR2純合鼠的T細(xì)胞是結(jié)合的。在anti-mCD3ε(0.2μg /mL)刺激條件下，mTNFα增強(qiáng)了hTNFR2 Ab2與B-hTNFR2純合鼠的T細(xì)胞結(jié)合，這表明mTNFα/hTNFR2信號(hào)通路在B-hTNFR2純合鼠中是可行的。

 

TNFR2抗體藥效驗(yàn)證
 

 

將鼠結(jié)腸癌MC38細(xì)胞皮下植入純合的B-hTNFR2小鼠中，當(dāng)腫瘤體積達(dá)到約100 mm³時(shí)，對(duì)小鼠進(jìn)行分組，然后使用抗人類TNFR2抗體進(jìn)行治療。與對(duì)照組相比，兩種人TNFR2抗體以不同程度抑制腫瘤生長(zhǎng)，證實(shí)B-hTNFR2小鼠模型是體內(nèi)TNFR2抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。
 

參考資料

[1]Faustman D, Davis M. TNF receptor 2 pathway: drug target for autoimmune diseases. Nat Rev Drug Discov 2010, 9(6): 482-493.

[2]Torrey H, Butterworth J, Mera T, Okubo Y, Wang L, Baum D, et al. Targeting TNFR2 with antagonistic antibodies inhibits proliferation of ovarian cancer cells and tumor-associated Tregs. Sci Signal 2017, 10(462).

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