如何判斷色譜柱換新的時間

當(dāng)柱子塔板數(shù)降低到新柱子百分之幾時需更換
 

色譜工作者常會碰到這樣的問題，什么時候該換色譜柱了?色譜柱的塔板數(shù)能體現(xiàn)色譜柱的狀態(tài)嗎?確定表明一支色譜柱應(yīng)該“退休”的標(biāo)準(zhǔn)，從經(jīng)驗來看，當(dāng)一支色譜柱的塔板數(shù)降低到新柱子的百分之多少時就可認(rèn)為該色譜柱不能再使用了呢?將塔板數(shù)作為評價色譜柱質(zhì)量的唯一指標(biāo)合適嗎?如何判斷一根色譜柱不能再用了呢?
 

     塔板數(shù)是一個粗略的指標(biāo)，不能作為評價色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)。通常使用塔板數(shù)來考察色譜系統(tǒng)：將新柱子接到儀器上，根據(jù)色譜柱生產(chǎn)商提供的測試條件測試該色譜柱，你應(yīng)該得到和分析報告上同樣的結(jié)果。最差也應(yīng)該得到比報告值低10%的塔板數(shù)。如果你所測得的塔板數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于廠家提供的報告數(shù)據(jù)，這就說明你的色譜系統(tǒng)可能存在一些問題。進(jìn)樣器、柱外效應(yīng)、毛細(xì)連接以及檢測器都是容易出現(xiàn)問題的地方。

利用壓力、分辨率和峰形混合指標(biāo)考察色譜柱的狀態(tài)
 

相信每個色譜工作者都會關(guān)心分辨率，分辨率是考察一根色譜柱分離具體樣品好壞程度的指標(biāo)。然而需要考慮的另一個因素是塔板數(shù)對分辨率的影響僅僅是平方根的關(guān)系，這意味著當(dāng)一根色譜柱的塔板數(shù)下降50%，分辨率僅僅下降7%。而當(dāng)一根色譜柱塔板數(shù)下降為新柱子一半時，肯定會出現(xiàn)其它更加嚴(yán)重的癥狀提示你這根色譜柱的壽命不長了。在實際工作中，大多數(shù)色譜方法僅僅需要這些塔板數(shù)的一半，這些色譜方法還有優(yōu)化的空間的�？梢�，色譜柱的塔板數(shù)不是分離中最重要的參數(shù)。較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標(biāo)來考察一根色譜柱的狀態(tài)。
 

     （1）壓力測量：壓力測量最容易，通常確定的色譜方法要滿足以下要求：用新柱子時柱壓不高于2500psi，在任何情況下壓力都不超過3000psi。盡管現(xiàn)代的液相色譜系統(tǒng)都可在更高的壓力下使用，但由于高壓產(chǎn)生的系統(tǒng)損耗和泄漏的問題會很嚴(yán)重。當(dāng)壓力超過3000psi時，需要考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。如果更換濾片后壓力仍然高，則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經(jīng)被污染，這提示該換柱子了。有統(tǒng)計表明，超過60%的色譜柱損壞是由壓力過高引起的。

     （2）分辨率：分辨率是考察色譜柱的一項重要指標(biāo)，只要兩個組分可以獲得基線分離，對該分析物的定量就不會有什么問題。對于對稱的高斯峰而言，1.5的分辨率即可得到基線分離；若Rs在1.7~2.0之間則更好。若峰拖尾嚴(yán)重則需要更高的分辨率。將分辨率作為色譜柱評價指標(biāo)的好處是可以直觀地看到相鄰峰的分離情況。

     （3）峰形拖尾：考察色譜柱質(zhì)量的一個標(biāo)準(zhǔn)是峰形拖尾情況，廠家測試報告的峰形都非常漂亮，但這并不代表該色譜柱分析實際樣品的情況。實際樣品中總是含有或多或少引起峰形拖尾的組分。值得一提的是含有氮原子的化合物，這些化合物和硅膠骨架上的游離硅羥基結(jié)合非常緊密，隨著色譜柱使用時間越長，鍵合相流失，拖尾更加嚴(yán)重。但拖尾情況的改變不像分辨率的改變那樣能夠馬上看出來，因此最好定一個拖尾因子的上限，如美國藥典規(guī)定拖尾因子不超過1.8。

確定色譜柱“退休”標(biāo)準(zhǔn)最佳時間
 

       確定色譜柱“退休”標(biāo)準(zhǔn)的最佳時間是當(dāng)開發(fā)分析方法或進(jìn)行方法認(rèn)證時。通常在開發(fā)分析方法的過程中會試驗幾根色譜柱，分析足夠多的實際樣品，依此可以知道當(dāng)分離變差時是什么樣的情況，一般傾向于在開始時使用一個寬的范圍。根據(jù)經(jīng)驗，如果在開始時緊縮系統(tǒng)適用性要求，在方法認(rèn)證后再放寬這個要求是很困難的。在分析實際樣品之前進(jìn)行系統(tǒng)適用性考察，以確保該色譜方法滿足分析者可以接受的標(biāo)準(zhǔn)