B-hCD3E人源化小鼠的百變基因編輯策略

 

B-hCD3E mice數(shù)據(jù)內(nèi)容包含：
 

基因編輯策略

純合小鼠人源CD3E蛋白流式表達(dá)分析

純合小鼠T細(xì)胞激活功能流式分析

CD3E單特異性抗體體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)及給藥后T,B細(xì)胞清除流式分析

Blinatumomab雙抗體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)

CD3E 雙抗體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)^新

CD3-hEpCAM雙抗體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)^新
 

基因功能簡(jiǎn)介
 

CD3e( CD3e molecule)編碼CD3-epsilon多肽，與 CD3-γ、-δ 和-ζ以及 T 細(xì)胞受體 α/β 或 γ/δ 異二聚體共同構(gòu)成TCR-CD3復(fù)合物。此復(fù)合物是 T 細(xì)胞上常見(jiàn)的表面標(biāo)記物，不僅作為形成 T 細(xì)胞受體 (TCR)-CD3 復(fù)合物的必需成分，而且作為外部信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子具有重要功能，是調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能的靶分子之一。CD3-epsilon多肽在 T 細(xì)胞發(fā)育中起重要作用，該基因的缺陷將導(dǎo)致免疫缺陷。
 

 

TCR-CD3 復(fù)合物及其信號(hào)通路^[1]

 基本信息
 

 基因編輯策略
 

 

 

B-hCD3E純合小鼠人源CD3E蛋白表達(dá)分析
 

 

 

分離C57BL/6和B-hCD3E小鼠（n=3）脾細(xì)胞，流式檢測(cè)hCD3E蛋白表達(dá)情況。
 

結(jié)果表明：野生型 C57BL/6 小鼠中可檢測(cè)到mCD3蛋白表達(dá)，純合B-hCD3E小鼠中只檢測(cè)到hCD3蛋白表達(dá)。
 

 純合小鼠T細(xì)胞激活功能流式分析
 

 
 

分離C57BL/6 和 B-hCD3E純合小鼠 (n=4) 脾臟中的 T 細(xì)胞，與抗 CD3 抗體孵育 24h，流式檢測(cè) T 細(xì)胞增殖情況。
 

結(jié)果顯示：抗 hCD3 抗體特異性活化 B-hCD3E純合小鼠的T 細(xì)胞，且其活化水平與抗 mCD3 抗體處理的 C57BL/6小鼠相似，表明胞外區(qū)人源化改造對(duì)B-hCD3E純合小鼠T細(xì)胞的活化無(wú)明顯影響。
 

 CD3E單特異性抗體體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)
 

 
 

C57BL/6(A) 和B-hCD3E純合小鼠(B)接種MC38，待腫瘤體積約150±50mm³ 后分組（n=5），結(jié)果顯示：兩種小鼠模型中，mPD-1抗體均顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，表明：胞外區(qū)人源化改造對(duì)B-hCD3E純合小鼠T細(xì)胞的胞內(nèi)信號(hào)傳遞無(wú)明顯影響。
 

同時(shí)，hCD3E抗體顯著促進(jìn)B-hCD3E小鼠腫瘤生長(zhǎng)，而對(duì)C57BL/6小鼠腫瘤的生長(zhǎng)基本無(wú)影響。進(jìn)一步研究表明：給藥（hCD3E抗體）后出現(xiàn)AICD效應(yīng)，B-hCD3E小鼠T細(xì)胞被清除，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。
 

 CD3E單特異性抗體給藥后T,B細(xì)胞清除流式分析
 

 
 

流式檢測(cè)給藥后小鼠血液中 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞的比率。給藥后 48 小時(shí)，從外周血中分離淋巴細(xì)胞。抗 hCD3 抗體治療組由于 CD3E 抗體治療引起的活化誘導(dǎo)細(xì)胞死亡 (AICD) 效應(yīng)，T 細(xì)胞比例明顯下降。而抗 mPD-1 抗體組 T 細(xì)胞比例無(wú)明顯變化。 
 

（A）與hIgG Ab相比，CD19⁺細(xì)胞各組間無(wú)顯著性差異。（B）與hIgG Ab相比，h-CD3 Ab治療后血液中TCR-β百分比顯著降低。(C) 與 hlgG Ab 相比，血液中 hCD3 Ab 處理后CD4⁺百分比下降。(D) 與 hlgG Ab 相比，血液中 hCD3 Ab 處理后 CD8⁺百分比下降。
 

 Blinatumomab雙抗體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)
 

 

接種MC38-hCD19至B-hCD3E純合小鼠皮下，腫瘤組織接近150±50mm³時(shí)進(jìn)行分組（n=6），注射高、中、低不同劑量的Blinatumomab。
 

結(jié)果表明：高劑量的hCD3E雙特異性抗體能夠有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。證明B-hCD3E 小鼠模型是hCD3E 雙特異性抗體體內(nèi)療效評(píng)價(jià)的有力工具。A.腫瘤體積±SEM。B.小鼠平均體重±SEM。
 

 CD3E 雙抗體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)
 

 
 

B-hCD3E 小鼠中 CD3E雙抗 的抗腫瘤療效評(píng)價(jià)。(A) CD3E 雙抗可有效抑制 B-hCD3E 小鼠腫瘤生長(zhǎng)。(B) 小鼠體重變化。如圖 A 所示，不同劑量的 CD3E雙抗可有效控制 B-hCD3E 小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，證明B-hCD3E 小鼠模型是hCD3E 雙特異性抗體體內(nèi)療效評(píng)價(jià)的有力工具。
 

 CD3-hEpCAM雙抗體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)
 

 
 

接種MC38-hEpCAM至B-hCD3E純合小鼠皮下，腫瘤組織接近150±50mm³時(shí)分組進(jìn)行體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)。
 

結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，抗人 CD3/hEpCAM 雙特異性抗體具有中度抗腫瘤活性。數(shù)據(jù)還表明，抗鼠 CD4（一種 CD4 消耗抗體）可增強(qiáng)抗人 CD3/hEpCAM雙特異性抗體的抗腫瘤活性。

 

參考文獻(xiàn)
 

[1] Ngoenkam, J., Schamel, W. W., & Pongcharoen, S. (2017). Selected signalling proteins recruited to the T-cell receptor-CD3 complex. Immunology, 153(1), 42–50. doi:10.1111/imm.12809.
 

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