血清知識大盤點

由于血清來源于動物，且含有細胞培養(yǎng)中所需的各種營養(yǎng)（血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等），這奠定了血清是細胞培養(yǎng)實驗中最普遍的試劑的基礎。

目前血清采集地主要分布在以下國家：
 

市面上的牛血清產品名稱雖然五花八門，但根據其不同的特性，追其根本，大致可分為以下四種。根據牛的取血年齡可以區(qū)分：

胎牛血清（Foetal Bovine Serum，簡稱FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹心臟穿刺采血得來的血清。

國產胎牛血清（并無明確定義，但通常用此命名）指的是出生4-6小時，且未進行哺乳（unsuckled）進食的新生牛，有時還稱作國產新生牛血清。 

新生牛血清（Newborn Calf Serum，簡稱NBCS，或稱小牛血清）指的是出生14天-3個月進行取血的牛血清。

成年牛血清（Adult Bovine Serum，簡稱ABS）指的是取血時牛齡通常超過12個月的牛血清。

以上取血牛齡的差異主要是受當地國家畜牧業(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響，因為牛血多為畜牧業(yè)副產業(yè)，并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。

幾種血清的比較：

這幾種不同牛齡血清所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組分與比例不同。常規(guī)來說，年齡越小的牛血清，細胞培養(yǎng)效果越好。胎牛血清培養(yǎng)效果好于新生牛，且因為胎牛未進食過母乳，所以IgG含量低。故目前多數實驗人員選擇的都是胎牛血清進行細胞培養(yǎng)。

胎牛血清根據實驗要求的不同又進行了特殊加工工藝加工，那么在這么多種類的血清面前，要怎么選擇適合自己細胞培養(yǎng)的那一款呢？
 

★ 我們需要知道都有哪些種類的牛血清和它們的用途：

1、透析血清

分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標定特定成分進行研究的實驗中。

2、碳吸附血清

使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質，如某些激素、細胞因子、生長因子等，去除作用對分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗證激素的作用效果。

3、去外泌體血清

適用于收集細胞分泌的外泌體時使用。

4、低IgG血清

用于研究抗體、病毒和病毒反應、細胞表面抗原表位。

5、四環(huán)素血清

應用于使用敏感四環(huán)素誘導表達系統(tǒng)的細胞培養(yǎng)(Tet-on, Tet-off)，以及其它對四環(huán)素敏感的實驗中。

6 、IR (輻照)

鈷60伽馬輻照劑量在3.5Mrad. 通過直接與間接作用將生物大分子（如核酸）鍵結破壞，人畜用藥物/疫苗，及對微生物負荷(Bioburden)要求最高水平的實驗。

7、HI (熱滅活)處理血清

56℃, 30Min, 破壞補體，確保細胞與抗體結合不會發(fā)生裂解。

8、胚胎干細胞（ES）專用血清

是從多個批次的胎牛血清篩選出特定批號，適用于人及小鼠胚胎干細胞、成體干細胞及原代細胞長期培養(yǎng)。

9、間充質干細胞（MSC）專用血清

從多個批次的胎牛血清篩選出特定批號，經過骨髓，脂肪組織及臍帶來源的間充質干細胞的細胞活性嚴格測試，通過傳代及分化比例測試。
 

其他動物血清

10、馬血清

10%馬血清可代替FBS用于支持SRBC的體外抗體應答, 常與牛血清結合或單獨作為哺乳動物細胞培養(yǎng)的補充培養(yǎng)基。

11、豬血清

豬血清在染色體研究中表現非常出色，可用于淋巴細胞培養(yǎng), 疫苗生產（生產支原體）, 中和脂質體包裹的腺相關病毒（AAV）, 用于誘導大鼠肝纖維化, 作為酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）中的標準陰性參考。

12、兔血清

正常兔血清可作為免疫分析的阻斷劑和對照。在免疫組織化學和免疫細胞化學方面，各種研究均采用20%或1:200稀釋兔血清作為阻斷劑。

13、羊血清

• 用于生物醫(yī)學研究的大多數細胞系和原代培養(yǎng)物上，FBS的合適替代物，病毒分離和鑒定，病毒學研究。

• 用作魚類細胞培養(yǎng)的有效NBCS替代物。

• 可成功地代替胎牛血清在生長培養(yǎng)基中長期用于環(huán)孢蘑菇的體外繁殖。

胎牛血清成分已知的已有上千多種，以下為主要成分表：

各位老師可以根據自己的實驗需求選擇不同的血清。

 

★ 我們同時為您收集了一些使用血清時的典型問題：
 

01、血清的顏色如何？

為何有的胎牛血清顏色偏紅，而有的偏黃？是因為胎牛血清顏色是由血紅蛋白（鮮紅）和膽紅素（黃）決定的，主要是受血紅蛋白影響。血紅蛋白含量很低時，含少量膽紅素，呈淡黃或金黃。血紅蛋白含量高時，會呈現淡紅色。

需要長期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱（未開封血清有效期為5年）。若存放于4℃，請勿超過1個月，若一次無法用完一瓶，建議將血清無菌分裝并冷凍。
 

02、血清如何解凍，使用前是否需要過濾？

血清解凍需采用逐步解凍法：將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天，然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉入37℃解凍，這樣因溫差較大易造成蛋白質凝結并出現沉淀。
 

本公司血清在ISO13485認證的廠房中生產，經過3次0.1μm過濾，出廠經過檢測并且會使用三種以上的細胞株進行培養(yǎng)測試及無菌檢測，污染幾率非常非常非常（重要的事情說三遍）低。通常細胞污染有非常多的可能性，根據協(xié)助使用者進行分析檢測，結果表明絕大部分都是因人為操作失誤導致污染。因此買來的血清不需要再次進行過濾。
 

下圖為人肉眼和光學顯微鏡所能觀察到的微粒大小。由于我們的血清是經過3次0.1μm過濾，因此若肉眼可以觀察到異物時，可以考慮：
 

• 是否血清溶解后蛋白質凝集

• 是否操作時導入污染物
   

 

03、為什么血清中會有沉淀生成，主要成分是什么，會對實驗有什么影響？

血清中沉淀主要有：纖維蛋白（絮狀沉淀），胎球蛋白^[1]，脂蛋白，冷凝集素，玻連蛋白，磷酸鈣（顯微鏡下小黑點沉淀），膽固醇等。

原因：造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活，反復凍融，長期儲存于2-8℃或者室溫。

預防：非必要，不用熱滅活；避免反復凍融；-20℃保存；4℃全融（期間間斷搖晃均勻）；2000rpm離心5分鐘(不建議用0.2um濾膜過濾） ，取上清使用。
 

BI原廠鏈接：http://www.bioind.com/support/product-faqs/fbs-faqs/

美國ATCC：https://www.atcc.org/
 

04、黑膠蟲是來源于血清嗎？

目前科學界對黑膠蟲的身份并無定論, 通常是顯微鏡下觀察到密密麻麻的小黑點在培養(yǎng)基中自主游動，就稱為黑膠蟲污染。本公司技術服務部”Dr.Cell” 目前檢測的數十個所謂”黑膠蟲”樣本，其中62%為細菌（如Sphingomonas paucimobilis，Blastomonas natatoria strain），38%為支原體（如：Mycoplasma hyorhinis，Mycoplasma pulmonis strain）。黑膠蟲在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等，可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡。目前沒有充分的數據表明黑膠蟲來源于血清，因為其尺寸遠大于血清過濾時所用的0.1微米(μm)濾膜。建議各位老師通過使用三抗（Cat#: 03-032-1B）外加支原體處理試劑（Cat#: 03-038-1B）嘗試殺滅黑膠蟲。
 

05、血清存在批間差嗎？

因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。每個批號的組分和百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。

建議先進行批號測試，篩選出合適批號，購買半年甚至一年以上的用量，避免批間差造成實驗波動（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。
 

如有其他關于血清的問題，大家可以參考：小課堂FAQ|FBS基礎問答

本期血清介紹到這里就告一段落了

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Reference

【1】Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41

 

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