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大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

瀏覽次數(shù):817 發(fā)布日期:2020-4-3  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來(lái)檢測(cè)大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

    用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)測(cè)定。

工作原理:

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平。向預(yù)先包被了大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說(shuō)明書(shū) 1份 1份  
封板膜 2片(48) 2片(96)  
密封袋 1個(gè) 1個(gè)  
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品48ng/ml 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
鏈霉親和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
生物素標(biāo)記的抗CK-MB抗體 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
 
 
需要而未提供的試劑和器材:
  • 37℃恒溫箱。
  • 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水,
  • 一次性試管
  • 吸水紙
 
注意事項(xiàng):
  • 從2-8℃取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  • 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差
  • 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
  • 為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
  • 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  • 底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
 
洗板方法:
 
手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
 
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

標(biāo)本要求

1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作程序:
  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)
24ng/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12ng/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6ng/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3ng/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ng/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
  • 根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
  • 加樣:1)空白孔,空白對(duì)照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗CK-MB抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測(cè)樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗CK-MB抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  • 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
  • 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。
 
 
操作程序總結(jié):
 


 試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
 
檢測(cè)范圍:
檢測(cè)范圍:0.8ng/ml - 24ng/ml
 
保存條件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6個(gè)月(2-8℃)。
 
來(lái)源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司
聯(lián)系電話:400 0918 500
E-mail:lianshuo@vip.126.com

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