基因槍應用技術問答解疑

1. 基因槍轉化法對受體有啥要求？
基因槍對動物：任何可暴露于基因槍口外的組織（皮膚、器官）細胞、外植體和器官培養(yǎng)；

植物：田間和溫室使用、植物培養(yǎng)細胞和外植體；
酵母、細菌、其它微生物細胞器、葉綠體、線粒體；
受體廣泛。

2. 基因槍（顆粒轟擊法）相比傳統(tǒng)的轉化那些優(yōu)勢？
簡單快速功能靈活，各類細胞類型通用
只需要少量的DNA和細胞
能進行多質粒共同導入
能輸送大片段DNA
沒有無光的基因或蛋白被轉導

3. 基因槍都應用哪些方面比較多？
基因表達研究、基因治療、遺傳免疫、神經(jīng)細胞染料標記、遺傳育種

4. 基因槍轉化過程中氣源對人體是否有傷害？
基因槍轉化過程中使用的氣源一般是純度比較高的氮氣或者氦氣，氮氣占空氣的74% 完全無害= = 氦氣稀有氣體，比氮氣更穩(wěn)定，不發(fā)生化學反應（除了物理方法）

5. 作為轉化的動力源氮氣和氦氣哪個更好？
氫氣易燃易爆 氧氣助燃且可能影響宿主 ，氦氣是惰性氣體，動力強勁較適合用于轉基因
另外氮氣也可以的。

6. 基因槍法可以得到永久轉基因植株嗎？
基因槍法注入基因后，該植物原則上一直都是轉基因植物，無性繁殖的后代也一直是轉基因植物，而其種子繁殖的下一代則不一定，有可能種子繁殖的下一代含有目標基因，也可能沒有。

7. 影響基因槍轉化的因素？
首先是氣源的壓力大小，以及射擊距離，實驗證明轟擊次數(shù)太多也會造成對細胞的傷害，因此一般以2-3次為宜。

8. 子彈制備過程中標配的金粉一瓶能打多少次？
一瓶標配的金粉是250mg，每槍金粉含量為0.5mg，理論值是可以打500槍左右

9. 子彈制備過程中標配的亞精胺，CaCl₂ 都什么品牌的比較好？
亞精胺選擇sigama的就行，CaCl₂   選擇國藥的就行

10. 子彈制備過程中需要準確稱取金粉嗎？這么小的重量如何保證準確性？
在沉淀的金粉中加入4ml 50%的甘油或者超純水制作成母液，這樣100μl懸浮液于離心管中（此管可打12槍，根據(jù)實驗樣品多少預先分幾個小管），根據(jù)實際需求取液體，這樣保證了重量的準確性

11. 子彈制備過程中金粉如何滅菌？
制作成的母液直接全自動高壓滅菌鍋滅菌即可，千萬注意沖蓋，以免造成損失

12. 子彈制備過程中金粉母液如何保存？
制作成的母液直接4度冰箱保存即可，最多可以存放2年左右

13. 基因槍轉化的效率大概為多少？瞬時表達需要打多少槍才可能出效果？
遺傳育種的轉化效率大概是10^-3，瞬時表達大概每個樣品打2-3槍，每個樣品打三個重復即可

14. 制作好的母液，再下次取的時候怎么保證均勻？
直接旋渦振蕩器，然后超聲波清洗機，這樣再取母液之前樣品均一，保證了實驗的準確性。

15. 載體DNA純度越高，轉化效果越好，如何保證濃度呢？
DNA純度越高，轉化效果越好，但轉化頻率并不與DNA的濃度成正比，相反，DNA的終濃度過高會與微彈形成大的凝結，反而降低了轉化頻率，目前普遍采用DNA 濃度為1μg/μl，但是一般試劑盒提取濃度為400ng/ul左右，因此要么選擇濃縮，要么選擇手提為宜。

16. 手提基因槍和臺式基因槍應用范圍有啥區(qū)別？
手提基因槍主要應用于活體或者戶外植物以及需要貼壁轟擊的受體，臺式主要適用于組織，或者外植體以及細胞器、葉綠體、線粒體。原理沒有啥區(qū)別主要是受體選擇上，原則上可以通用

17. 金粉或者鎢粉一般選用直徑是多少？
金粉或鎢粉.(植物細胞選用1.0μm，大部分動物細胞用1.6-1.7μm，微生物一般用0.6μm)。鎢粉是可以進行試驗的，只是要在3-4天內用完制作好的子彈，容易氧化抱團。

18. 子彈制備儀的作用？
子彈制備儀其實是一個自動旋轉的吹氣裝置，主要作用是把液體里面的金粉均勻鋪蓋在子彈管上面，如果需要制作大量子彈時候，子彈制備儀的優(yōu)勢就出來了

19. 子彈制備儀試用注意事項是什么？
子彈制備儀最大的注意事項就是在吹氣之前，鋼瓶的壓力要調到0.1MPa以下，太大了容易爆破子彈制備儀的軟管。

20. 如果做瞬時表達只需要做幾個子彈怎么辦？
選擇手動制作，直接用移液器加樣與子彈槍孔中，360度旋轉加入，防止流出，然后樹立與超凈臺中，打開最小檔位的風吹5分鐘左右，具體時間看金粉掛壁情況。