高GC含量PCR樣本的擴增困難與防止污染與降解的操作方法

       每天做實驗小心翼翼，時時擔(dān)心提取的DNA被污染、被降解。終于，廢了九牛二虎之力，好不容易提取到高質(zhì)量的DNA，然而PCR仍然P不出來條帶。是試劑加漏了嗎？是酶失活了嗎？換上新試劑，冰上重來一次，然并卵，不僅P不出來，更重要的是也不知道為啥P不出來，貝多芬都彈不出我的悲傷！

 

       算了，悲傷往事不再提，今天小編就總結(jié)教訓(xùn)，帶你啃一啃PCR的這個硬骨頭吧！PCR擴增不出來條帶的原因有很多，諸如引物設(shè)計有誤，DNA模板已降解，酶失活或者有雜酶污染，緩沖液條件不當，模板DNA的GC含量太高等等。大部分原因可以通過換試劑得到解決，但是對于高GC含量的樣本，往往束手無策。

 

 

       在DNA（A、T、C、G）4種堿基中，鳥嘌呤（G）和胞嘧啶（C）所占的比率稱為GC含量。因為G、C之間形成三對氫鍵，解鏈所需能量較高，所以模板很難打開，高GC含量（G+C≥60%）模板擴增中所面臨的主要困難是模板中容易形成穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)妨礙DNA聚合酶在模板上的推進，而且模板上可能存在多個非特異性的引物復(fù)性位點，導(dǎo)致非特異性擴增，甚至很多時候擴增不出靶基因。高GC含量的DNA序列廣泛存在于不同物種的基因組中。人類高GC含量的DNA序列雖然只占了全基因組的3%，但有28%的基因位于這些區(qū)域內(nèi)。此外，包括啟動子和增強子在內(nèi)的許多基因重要調(diào)控區(qū)域也大都由高GC含量的DNA序列組成。

 

       目前，研究學(xué)者建立了各種不同的方法來解決高GC含量DNA模板擴增困難的問題，包括降落PCR、添加增強劑（如DMSO）等。雖然這些方法和手段的單獨使用都獲得了一定的效果，但是對于引物和模板的要求普遍過于苛刻，適用范圍也比較局限，并不具有普遍適用性，而且往往經(jīng)過多次摸索和嘗試，也不易得到較好的結(jié)果。

 

 

       所以您還在為高GC含量PCR煩惱嗎？您還在為擴增不出來結(jié)果而焦心嗎？PCR試劑領(lǐng)軍品牌Solis BioDyne可以為您輕松解決這個難題，可同時提供適合高GC含量PCR的預(yù)混液以及添加劑：

 

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