Amicon® Pro蛋白純化濃縮操作指南

耗時長，產(chǎn)量低，
大家其實都一樣
 
蛋白從克隆表達到純化脫鹽濃縮，一路經(jīng)過千山萬水，寶貴的活性蛋白產(chǎn)量是很多人的“命根子”。然鵝，努力的我們還是苦惱的時候多，欣喜的時候太少太少～～

 
 
純化黑科技，是時候放大招了
 
有沒有什么好方法能讓操作步驟少一點、再少一點，而同時蛋白的活性及產(chǎn)量損失也少一點、再少一點？？
 
讓我們看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧
——Amicon^® Pro

由傳統(tǒng)方法升級到革命性的Amicon^® Pro純化超濾系統(tǒng)，純化、濃縮、換液從此不同。
 
真的能這樣操作？？
視頻：https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html
 
讓我們一起來欣賞一下Amicon^® Pro帶來的蛋白純化濃縮的流暢操作。
  
 
操作1
親和純化——多樣本操作，更快更好
6次低速離心，總耗時~100分鐘
（含65分鐘孵育時間）
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1. 在Amicon^® Pro上樣池中加入200µL親和純化樹脂（根據(jù)融合標簽選擇，50%懸濁液）
和1.5mL漂洗緩沖液。1,000×g離心1min。
2. 加入0.5mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1h，其間可溫和攪動促進結(jié)合。
3. 1,000×g離心1min 以去除未結(jié)合雜質(zhì)。
4. 加入1.5mL漂洗緩沖液，1,000×g離心1min。
5. 上樣池下端接上Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管（有5種截留分子量規(guī)格可選）。
6. 加入1mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5min。
7. 4,000×g離心15min。
8. 加上蛋白樣品最終需要的緩沖液1.5mL。4,000×g離心15min，置換緩沖液的同時進行濃縮。
9. 倒轉(zhuǎn)Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管，1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。
 
操作2
脫鹽/緩沖液置換并濃縮——
20倍體積溫和換液，效率大大提升
5次低速離心，總耗時~35分鐘
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1. 在上樣池中加入0.5mL TBS-T預(yù)濕Amicon^® Pro。1,000×g離心1min。
2. 優(yōu)化選做：加入1.5mL用于置換的緩沖液，1,000×g離心1min。
3. 上樣池下端接上Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管（有5種截留分子量規(guī)格可選）。
4. 加入1.5mL樣品，4,000×g離心15min進行濃縮。
5. 加入1.5mL需要置換的緩沖液，4,000×g離心15min，換液的同時進行濃縮。
6. 倒轉(zhuǎn)Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管，1,000×g離心回收處理好的蛋白。
 
操作3 
抗體標記——
操作步驟少、時間節(jié)省而抗體得率高
5次低速離心，總耗時~50分鐘
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1. 在上樣池中加入0.5mL TBS-T預(yù)濕Amicon^® Pro。1,000×g離心1min。
2. 加入抗體樣品
• 對于比較稀釋的樣品（< 1mg/mL）
- 上樣池下端接上Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管（建議使用50kDa）。
- 加上至多1mL抗體樣品， 4,000×g離心15min。
• 對于濃度較高的的樣品（ 1mg/mL）
- 在Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管（建議使用50kDa）中加入至多100µL樣品。
- 將裝有樣品的Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管接在Amicon^® Pro上樣池的下端。
3. Amicon^® Pro上樣池內(nèi)加入預(yù)先準備好的1.5mL含有染料的反應(yīng)混合液。
4. 4,000×g離心15min。
5. 優(yōu)化選做：將樣品在室溫下多孵育30 min。
6. 上樣池中加入1.5mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g離心15min換液同時濃縮。
8. 倒轉(zhuǎn)Amicon^® Ultra 0.5mL超濾管1,000×g離心回收標記好的抗體。
 

更多關(guān)于Amicon^® Pro的靈活應(yīng)用正在各個實驗室里被大家創(chuàng)造出來～～
歡迎告訴我們Amicon® Pro是如何幫助您提高蛋白操作效率的……
 
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Amicon^® Pro 24個/盒
（不含超濾管）
目錄號ACS500024
 
可自行搭配Amicon^® Ultra-0.5mL超濾管

• 3Kda 目錄號UFC500396 
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