Western Blot轉(zhuǎn)膜技術(shù)要點

這個年過的有點崎嶇，在面對社會性問題時疫情給我們帶來了很多正能量，相信很多還沒返校的人已經(jīng)給自己立了flag。在我們回望過去的一年，這個時代已經(jīng)變了。任何的進步都被透明公開的呈現(xiàn)在我們面前，而我們看到的好消息遠比自己收獲的多，所以我們總?cè)滩蛔�問自己�?strong>“我成長了嗎？”“我的實驗?zāi)茼樌�些嗎�?/strong>” “我的科研之路還要繼續(xù)嗎？”
 
躺著想問題遠比站著干大事來的容易，而成功的人總是在干大事的時候不斷解決問題并總結(jié)問題。在科研的道路上，有如火箭式上升連發(fā)3篇Science的的90后CRISPR女神楊璐菡，有如深耕播種的共和國勛章得主袁隆平院士、屠呦呦等人，在感慨別人的成就時，我們卻不曾深究過其背后的秘訣或精神。
 
世說“好事多磨”，小編看來并非經(jīng)歷多少磨難、重做多少實驗才能成就好事、好實驗，而是在成功的道路上多磨礪自己的思維并可控地執(zhí)行在實踐中。在師兄師姐們告訴你一堆他們摸索出來的道理時，你是全盤接收還是思辨下哪里不對？“這樣做就對了！”就真的對了嗎？“差不多就行了！”還能再粗糙點嗎？！
 
所以今天“膜法學(xué)院”開講的第一課是：WB實驗的轉(zhuǎn)印膜，你用對了嗎？還在一“膜”到底嗎？
選膜是個大學(xué)問，而你將這個選擇權(quán)交誰了呢？“我們實驗室一直用這個，用的挺好的。”待我們看看科技革新的成果再判斷你是否有更好的選擇。
 
首先，WB常用的轉(zhuǎn)印膜一般是兩種，依據(jù)材質(zhì)分為PVDF膜（最常用）和NC膜，簡要概括兩者區(qū)別如下：
表1. PVDF膜和NC膜的特性和應(yīng)用對比

 
其次，WB轉(zhuǎn)印非�？简瀸嶒炚邔ρ芯康牡鞍准捌渌鶎侪h(huán)境是否足夠了解。豐度/表達量如何？是否需要去除高豐度雜蛋白？分子量區(qū)間多大？轉(zhuǎn)印效率如何？蛋白流失了嗎？

圖1. -P膜（左）和-PSQ膜（右）后面襯墊-PSQ膜，可以看到部分高豐度蛋白穿過-P膜滲漏到襯墊的膜上。
 
由此可見，膜孔徑越小，小分子蛋白（<20kDa）滲漏/流失越少，蛋白載量越高，更適合低豐度蛋白檢測。
 
其三，WB實驗依據(jù)需要顯色的形式分為化學(xué)發(fā)光和熒光兩者，熒光WB對膜的背景要求更高，雖然可以依賴成像儀或者后期軟件進行微調(diào)，但對于低豐度蛋白、多重?zé)晒鈾z測或者想發(fā)高分文章，還是需要原圖示人。選擇低熒光背景、高蛋白載量的膜，如下FL系列即為熒光WB最佳轉(zhuǎn)印膜選擇。

圖2. 幾種膜在熒光WB成像中的表現(xiàn)，F(xiàn)L膜具有最好的背景。
 
再者，考慮到安全因素、節(jié)約時間和經(jīng)費，亦可選擇安全型轉(zhuǎn)印膜 Immobilon-E系列，省去甲醇預(yù)激活步驟。
 
綜上，WB轉(zhuǎn)印膜依據(jù)蛋白類型、分子量和成像形式有多種優(yōu)質(zhì)選擇。
表2. Immobilon^®轉(zhuǎn)印膜全系列產(chǎn)品選擇指南

所以在你可以有選擇的時候千萬別湊合，每個細節(jié)都會決定我們將來的高度。

 
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