如何選擇最亮的熒光染料-熒光染料亮度排行匯總

       熒光染料是細(xì)胞生物學(xué)等科學(xué)研究中不可或缺的重要工具，熒光濾色塊是熒光顯微鏡中至關(guān)重要的一個部件。我們大家在操作熒光染料亮度的時候，我們可以按照上面的比較方法去比較熒光染料的亮度，那么一般熒光染料亮度怎么進(jìn)行比較?

 

       熒光染料的亮度可以用來比較不同熒光染料的熒光標(biāo)記效果，通過陰性細(xì)胞群與陽性細(xì)胞群的熒光信號之間的關(guān)系來表示。但陰性細(xì)胞群的熒光信號受到信號強(qiáng)度、自發(fā)熒光、非特異性染色、儀器的電子噪聲等多個因素相關(guān)。

 

       熒光染料染色指數(shù)是陽性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度與陰性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度之差與陰性細(xì)胞群熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)差之間比值的一半。熒光染料染色系數(shù)只和抗體克隆與質(zhì)量、熒光團(tuán)純度與質(zhì)量、熒光修飾比、激光線及其功率、長通和帶通濾光片、目的細(xì)胞等因素相關(guān)。

 

       熒光染料的染色指數(shù)與熒光染料的亮度呈正相關(guān)，也就是熒光染料亮度越高，染色系數(shù)也就高。

 

       DNA染料：

 

 

       圖1.用Cell Navigator™脂質(zhì)液滴熒光測定試劑盒（Cat＃22735）和Nuclear Green™LCS1（Cat＃17540）染色的油酸處理過的HeLa細(xì)胞的熒光圖像。

 

染料名稱	標(biāo)記部位	激光	濾光片組	亮度
DAPI（17510）	DNA	355 nm	DAPI	6
Nuclear Blue（17548）	DNA	355 nm	DAPI	6
Nuclear Green（17540）	DNA	488 nm	FITC	6
Nuclear Orange（17541）	DNA	488 nm	Cy3	6
Propidium Iodide（17515）	DNA	532 nm	Texas Red	3
Nuclear Red（17542）	DNA	633 nm	Cy5.5	6

 

       細(xì)胞增殖染料：

 

 

       圖2.用CytoTell™Green和CFSE進(jìn)行的細(xì)胞增殖測定。在第0天，用CytoTell™Green或CFSE對Jurkat細(xì)胞（〜2×106細(xì)胞/ mL）進(jìn)行染色。在指定的那天，以1：1的比例連續(xù)通過細(xì)胞。在通過當(dāng)天，在FITC通道中用ACEA NovoCyte 3000流式細(xì)胞儀測量熒光強(qiáng)度。連續(xù)幾代人以不同的顏色代表。

 

染料名稱	功能	激光	濾光片	亮度
CytoTell Blue（22251）	增殖	405 nm	DAPI	6
CFSE（22022）	增殖	488 nm	FITC	7
CytoTell Green（22253）	增殖	488 nm	FITC	7
CytoTell Orange（22257）	增殖	488 nm	Cy3/TRITC	7
CytoTell UltraGreen（22240）	增殖	488 nm	FITC	7
CytoTell Red 590（22261）	增殖	561 nm	Cy3	7
CytoTell Red 650（22255）	增殖	633 nm	Cy5	7

       細(xì)胞活力檢測染料

 

 

       圖3.用CytoCalcein Violet 500（Cat＃22013）染色的活HeLa細(xì)胞圖像。細(xì)胞核用Hoechst 33342（Blue，Cat＃17535）染色。

 

染料名稱	功能	激光	濾光片	亮度
Calcein Blue（22006）	細(xì)胞活力	405 nm	DAPI	6
Calcein UltraBlue（21908）	細(xì)胞活力	405 nm	DAPI	6
CytoCalcein Violet 450（22012）	細(xì)胞活力	405 nm	DAPI	7
CytoCalcein Violet 500（22013）	細(xì)胞活力	405 nm	FITC	7
Calcein（22001）	細(xì)胞活力	488 nm	FITC	7
Calcein Orange（22008）	細(xì)胞活力	488 nm	TRITC	7
Calcein UltraGreen（21905）	細(xì)胞活力	488 nm	FITC	7
7-AAD（17501）	細(xì)胞活力	532 nm	Cy5	2
Calcein Red（21900）	細(xì)胞活力	561nm	Cy3/TRITC	7
Calcein Deep Red（21902）	細(xì)胞活力	633 nm	Cy5	7

 

       熒光標(biāo)記染料

 

       圖4.將 HeLa細(xì)胞與（Tubulin +）或不與（Tubulin-）小鼠抗微管蛋白一起孵育，然后與iFluor™488山羊抗小鼠IgG綴合物（綠色，左）或AlexaFluor®488山羊抗小鼠IgG綴合物（綠色，右）。細(xì)胞核用Hoechst 33342（藍(lán)色）染色。

 

染料名稱	功能	激光	濾光片	亮度
Alexa Fluor 350	標(biāo)記	355 nm	DAPI	2
iFluor 350（1020）	標(biāo)記	355 nm	DAPI	6
iFluor 450（1026）	標(biāo)記	405 nm	FITC	5
Pacific Green	標(biāo)記	405 nm	FITC	5
Pacific Orange	標(biāo)記	405 nm	TRITC	2
iFluor 405（1021）	標(biāo)記	405 nm	DAPI	6
iFluor 430（1052）	標(biāo)記	405 nm	FITC	6
Pacific Blue（570）	標(biāo)記	405 nm	DAPI	2
Alexa Fluor 555	標(biāo)記	488 nm	TRITC	4
Cy3（141）	標(biāo)記	488 nm	TRITC	4
Alexa Fluor 488（1812）	標(biāo)記	488 nm	FITC	5
FITC	標(biāo)記	488 nm	FITC	7
iFluor 488（1023）	標(biāo)記	488 nm	FITC	7
Oregon Green	標(biāo)記	488 nm	FITC	7
TRITC	標(biāo)記	488 nm	TRITC	7
PE-Alexa Fluor 594	標(biāo)記	488 nm	Texas Red	9
PE-Alexa Fluor 750	標(biāo)記	488 nm	Cy7	9
PE-iFluor 594（2584）	標(biāo)記	488 nm	Texas Red	9
PE-iFluor 750（2578）	標(biāo)記	488 nm	Cy7	9
PE（2558）	標(biāo)記	488 nm	TRITC	10
PE-Alexa Fluor 647	標(biāo)記	488 nm	Cy5	7
PE-Cy5（2610）	標(biāo)記	488 nm	Cy5.5	10
PE-Cy5.5（2613）	標(biāo)記	488 nm	Cy5.5	7
PE-Cy7（2616）	標(biāo)記	488 nm	Cy7	10
PE-iFluor 647（2577）	標(biāo)記	488 nm	Cy5	10
PE-Texas Red（2619）	標(biāo)記	488 nm	Texas Red	10
Alexa Fluor 555（1821）	標(biāo)記	532 nm	TRITC	5
Alexa Fluor 532（1819）	標(biāo)記	532 nm	TRITC	7
iFluor 514（1024）	標(biāo)記	532 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 532（1025）	標(biāo)記	532 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 546（1048）	標(biāo)記	532 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
Alexa Fluor 594（1830）	標(biāo)記	561 nm	Texas Red	6
iFluor 610（1038）	標(biāo)記	561 nm	Texas Red (610/40)	6
Texas Red（480）	標(biāo)記	561 nm	Texas Red	6
iFluor 555（1028）	標(biāo)記	561 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 568（1049）	標(biāo)記	561 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 594（1029）	標(biāo)記	561 nm	Texas Red (610/40)	7
Alexa Fluor 750（1839）	標(biāo)記	633 nm	Cy7	4
iFluor 750（1037）	標(biāo)記	633 nm	Cy7 (780/60)	4
iFluor 680（1035）	標(biāo)記	633 nm	Custom (712/25)	5
Alexa Fluor 680（1835）	標(biāo)記	633 nm	Cy5.5	6
Alexa Fluor 700（1836）	標(biāo)記	633 nm	Cy7	6
Cy7（290）	標(biāo)記	633 nm	Cy7	6
iFluor 647（1031）	標(biāo)記	633 nm	Cy5 (660/40)	6
iFluor 660（1032）	標(biāo)記	633 nm	Cy5 (660/40)	6
iFluor 700（1036）	標(biāo)記	633 nm	Custom (712/25)	6
Alexa Fluor 647（1833）	標(biāo)記	633 nm	Cy5	7
Cy5（151）	標(biāo)記	633 nm	Cy5	7
iFluor 633（1030）	標(biāo)記	633 nm	Cy5 (660/40)	7
APC-Alexa Fluor 750	標(biāo)記	633 nm	Cy7	8
APC-Cy5.5（2622）	標(biāo)記	633 nm	Cy5.5	8
APC-Cy7（2625）	標(biāo)記	633 nm	Cy7	5
APC-iFluor 700（2570）	標(biāo)記	633 nm	Cy7	8
APC-iFluor 750（16908）	標(biāo)記	633 nm	Cy7	8
APC（2554）	標(biāo)記	633 nm	Cy5	9
iFluor 790（1368）	標(biāo)記	633 nm	Cy7 (780/60)	3
iFluor 800（1379）	標(biāo)記	633 nm	Custom (840/20)	3
iFluor 810（1389）	標(biāo)記	633 nm	Custom (840/20)	3
iFluor 820（1399）	標(biāo)記	633 nm	Custom (840/20)	3
iFluor 860（1409）	標(biāo)記	633 nm	Custom (885/40)	3

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