PCR實(shí)驗(yàn)分區(qū)-基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)環(huán)境的設(shè)計(jì)

幸福的人都是一樣的，不幸福的人各有各的不同，隔壁師兄做出來的定量PCR曲線不僅完美，重復(fù)性也好，而我的實(shí)驗(yàn)卻一言難盡，該出峰的曲線不理想，不該出峰的卻都是峰，我能怎么辦，我也很絕望啊，核酸氣溶膠的污染悄無聲息，防不勝防，假陽性的結(jié)果讓做PCR的我崩潰抓狂……

是否有好的方法來進(jìn)行應(yīng)對呢？我苦思冥想……

那我們先來了解一下什么是氣溶膠？

氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系，在氣體與液體面摩擦?xí)r，操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管，離心機(jī)離心，擴(kuò)增后PCR產(chǎn)物開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及移液器槍反復(fù)吹吸樣品時(shí)都可形成氣溶膠而污染。

綜上所述，為了得到好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PCR反應(yīng)需要進(jìn)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)分區(qū)：

☑   常規(guī)需要設(shè)置3個(gè)獨(dú)立的分區(qū)：試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理和樣品制備區(qū)，擴(kuò)增檢測區(qū)，各區(qū)域空間完全獨(dú)立；實(shí)驗(yàn)室實(shí)施空氣流向控制，擴(kuò)增前和擴(kuò)增后區(qū)域應(yīng)具有獨(dú)立的通風(fēng)系統(tǒng)，擴(kuò)增后區(qū)域保持負(fù)壓狀態(tài)，其他區(qū)域保持常壓，防止擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。

理想情況下需要四個(gè)獨(dú)立分區(qū)：嚴(yán)格按照單一流向進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，即試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）—樣本制備區(qū)（2區(qū)）—擴(kuò)增分析區(qū)（3區(qū)），嚴(yán)禁逆流，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度為15°C-30°C為合格范圍等。

☑   除此之外，還要物品專用：各區(qū)域只用于特定操作，不得從事其他工作，例如試劑，工作服，儀器，手套，標(biāo)記筆等等均為該區(qū)專用，不得交叉使用。

☑     使用完的槍頭，廢液等，需要在專區(qū)進(jìn)行處理。

小編今天就總結(jié)到這了，還要繼續(xù)我的PCR實(shí)驗(yàn)去了！