細(xì)胞凋亡檢測-Caspase半胱氨酸蛋白酶與磷脂酰絲氨酸（PS）

 
1965年澳大利亞科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，結(jié)扎鼠門靜脈后，電鏡觀察到肝實質(zhì)組織中有一些散在的死亡細(xì)胞，這些細(xì)胞的溶酶體并未被破壞，顯然不同于細(xì)胞壞死。這些細(xì)胞體積收縮、染色質(zhì)凝集，從其周圍的組織中脫落并被吞噬，機(jī)體無炎癥反應(yīng)。1972年Kerr等三位科學(xué)家首次提出了細(xì)胞凋亡的概念，宣告了對細(xì)胞凋亡的真正探索的開始，在此之前，關(guān)于胚胎發(fā)育生物學(xué)、免疫系統(tǒng)的研究，肝細(xì)胞死亡的研究都為這一概念的提出奠定了基礎(chǔ)。
 
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅是一種特殊的細(xì)胞死亡類型，而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制。
 
細(xì)胞凋亡與程序性死亡
 
其實從嚴(yán)格的詞學(xué)意義上來說，細(xì)胞程序性死亡（PCD）與細(xì)胞凋亡是有很大區(qū)別的。細(xì)胞程序性死亡的概念是1956年提出的，PCD是個功能性概念，描述在一個多細(xì)胞生物體中某些細(xì)胞死亡是個體發(fā)育中的一個預(yù)定的，并受到嚴(yán)格程序控制的正常組成部分。例如蝌蚪變成青蛙，其變態(tài)過程中尾部的消失伴隨大量細(xì)胞死亡，高等哺乳類動物指間蹼的消失、顎融合、視網(wǎng)膜發(fā)育以及免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育都必須有細(xì)胞死亡的參與。
 
這些形形色色的在機(jī)體發(fā)育過程中出現(xiàn)的細(xì)胞死亡有一個共同特征：即散在的、逐個地從正常組織中死亡和消失，機(jī)體無炎癥反應(yīng)，而且對整個機(jī)體的發(fā)育是有利和必須的。因此認(rèn)為動物發(fā)育過程中存在的細(xì)胞程序性死亡是一個發(fā)育學(xué)概念，而細(xì)胞凋亡則是一個形態(tài)學(xué)的概念，描述一件有著一整套形態(tài)學(xué)特征的與壞死完全不同的細(xì)胞死亡形式。但是一般認(rèn)為凋亡和程序性死亡兩個概念可以交互使用，具有同等意義。
 
細(xì)胞凋亡與壞死的區(qū)別
 
雖然凋亡與壞死的最終結(jié)果極為相似，但它們的過程與表現(xiàn)卻有很大差別。
 
壞死（necrosis）：壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無序變化的死亡過程。表現(xiàn)為細(xì)胞 脹大，胞膜破裂，細(xì)胞內(nèi)容物外溢，核變化較慢，DNA降解不充分，引起局部嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。
 
凋亡是細(xì)胞對環(huán)境的生理性病理性刺激信號，環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的應(yīng)答有序變化的死亡過程。其細(xì)胞及組織的變化與壞死有明顯的不同。
 
Abbkine對于細(xì)胞凋亡的研究已經(jīng)深入到了細(xì)胞，蛋白和分子水平：
 
蛋白質(zhì)水平的Annexin V系列細(xì)胞早期凋亡試劑盒，檢測磷脂酰絲氨酸（PS）的外翻：
 

產(chǎn)品名稱	貨號	Abs/Em
Annexin V-AbFluor™ 555 Apoptosis Detection kit	KTA0003	Annexin V- AbFluor™ 555: Abs/Em = 555/565 nm	Cy3, TRITC, Alexa Fluor 546, Dylight 549
Annexin V-AbFluor™ 647 Apoptosis Detection kit	KTA0004	Annexin V- AbFluor™ 647: Abs/Em = 650/665 nm; PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)	Cy5, Alexa Fluor 647, Dylight 649

 
細(xì)胞水平的Caspase系列試劑盒，檢測凋亡相關(guān)蛋白Caspase的表達(dá)量，檢測中期凋亡：

貨號		產(chǎn)品名稱
KTA3024	細(xì)胞凋亡 （比色法）	Caspase-6 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3025		Caspase-8 Assay Kit (Colorimetric)

Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引發(fā)的級聯(lián)反應(yīng)是細(xì)胞凋亡過程的中心環(huán)節(jié)，其激活主要包括線粒體依賴途徑和死亡受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，激活后的下游Caspase，通過切割特異性底物，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

Abbkine凋亡研究試劑盒使用FAQ：

1.做TUNEL凋亡檢測，需要抗原修復(fù)或者冰凍修復(fù)嗎？
需要細(xì)胞固定，不需要做抗原修復(fù)，本類試劑盒標(biāo)記的是細(xì)胞核內(nèi)的斷裂基因，而不是抗原蛋白，因此不需要進(jìn)行抗原修復(fù)。

2.Annexin V-AbFluor™ 488 Apoptosis Detection kit試劑盒，可不可以在染色之后，等到60分鐘左右再去做下一步呢?
因為這個凋亡實驗是活染，細(xì)胞先染完第一種染料，如果間隔時間太長，細(xì)胞活力就會受影響。

3.Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (JC-1)試劑盒，能用分光光度計檢測嗎？
不建議用，該試劑盒是基于線粒體跨膜電位的變化，運(yùn)用JC-1進(jìn)行細(xì)胞染色，區(qū)分健康和凋亡細(xì)胞，建議用流式細(xì)胞儀或者熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。

4.檢測Caspase，組織樣本是400-500個細(xì)胞，該樣本量是否足夠？
本試劑盒需要組織的量大概是5 - 20 mg。