如何檢測(cè)蛋白是否泛素化

       繼上周整理的泛素化蛋白快速富集純化的解決方案后，最近又有客戶問“我想在體外檢測(cè)組織中的一個(gè)蛋白是否在處理因素作用后發(fā)生泛素化，請(qǐng)問有這方面的實(shí)驗(yàn)方法嗎，或者試劑盒嗎？”作為泛素研究領(lǐng)域的專家，LifeSensors可為您提供全面的泛素研究解決方案，如何鑒定靶蛋白是否發(fā)生泛素化修飾？你問了，我安排！

 

 

       如何判斷蛋白是否泛素化? 是哪種類型的泛素化修飾？ UbiTest可以給您答案。

 

       UbiTest檢測(cè)原理：先通過TUBEs富集純化樣本中的泛素化總蛋白，隨后，將分離到的泛素化蛋白經(jīng)或者不經(jīng)去泛素化酶DUBs處理，（+）/（-）DUBs處理的蛋白樣本用靶蛋白的特異性抗體進(jìn)行免疫印跡（WB）分析，通過條帶比對(duì)分析實(shí)現(xiàn)對(duì)泛素化蛋白的定性及半定量檢測(cè)。

 

 

 

       實(shí)例分析==＞

 

       樣本：Jurkat細(xì)胞裂解液

 

       實(shí)驗(yàn)?zāi)康模篗DM2和TNF-R1蛋白是否泛素化

 

       實(shí)驗(yàn)流程：通過TUBEs富集純化樣本中的泛素化總蛋白，經(jīng)去泛素化酶DUBs處理，后，用靶蛋白的特異性抗體進(jìn)行WB檢測(cè)

 

 

       檢測(cè)抗體：MDM2抗體

 

       Lane 1: 富集純化的蛋白樣本不經(jīng)DUBs處理

       Lane 2: 富集純化的蛋白經(jīng)廣譜型的DUBs處理（可以去除所有類型的多聚泛素鏈）

       Lane 3: 富集純化的蛋白經(jīng)特異性針對(duì)K48-泛素鏈的去泛素化酶處理（只能水解K48-泛素鏈）

 

       結(jié)果：Lane 2的條帶信號(hào)（~55kda）與Lane 1相比明顯增強(qiáng)，說明MDM2被泛素化修飾了

 

       Lane 3的條帶信號(hào)（~55kda）與Lane 1相比有所增加，但是比Lane 2的信號(hào)明顯減弱，說明特異性針對(duì)K48-泛素鏈的去泛素化酶并沒有水解掉靶蛋白近端的泛素，或者說MDM2還存在其他連接類型的多聚泛素鏈。

 

 

       檢測(cè)抗體：TNF-R1抗體

 

       Lane 1: 富集純化的蛋白樣本不經(jīng)DUBs處理

       Lane 2: 富集純化的蛋白經(jīng)廣譜型的DUBs處理（可以去除所有類型的多聚泛素鏈）

       Lane 3: 富集純化的蛋白經(jīng)特異性針對(duì)K63-泛素鏈的去泛素化酶處理（只能水解K63-泛素鏈）

 

       結(jié)果：Lane 2的條帶信號(hào)（~50kda）與Lane 1相比明顯增強(qiáng)，說明TNF-R1被泛素化修飾了

 

       Lane 3的條帶信號(hào)（~140kda）與Lane 1相比明顯減弱，Lane 3的條帶信號(hào)（~50kda）與Lane 1相比有所增強(qiáng)，說明TNF-R1的泛素化類型為K63，但是還存在其他類型的泛素化修飾，所以比Lane 2的信號(hào)弱很多。

 

貨號(hào)	名稱	產(chǎn)品說明
UM411	UbiTest Agarose-TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化
UM411M	UbiTest Magnetic TUBE Elution Kit
UM413	K63 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K63-泛素化修飾
UM413M	K63 Linkage Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit
UM414	K48 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K48-泛素化修飾
UM414M	K48 Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit
UM412	Linkage Profiling UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K63/K48-泛素化修飾
UM412M	Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit

 

       看到這兒，您心動(dòng)了嗎？馬上聯(lián)系小艾吧！

 

       或者掃描下方二維碼，即可聯(lián)系您的專屬客服哦~

 

 

       作為一家具有高端的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷高新技術(shù)開發(fā)區(qū)，服務(wù)面向全國(guó)。艾美捷科技是集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶，公司組建了一支經(jīng)驗(yàn)豐富的研發(fā)團(tuán)隊(duì)-艾美捷生物技術(shù)中心，進(jìn)入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!

 

       艾美捷科技與國(guó)內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多國(guó)際知名品牌的中國(guó)總代理或一級(jí)代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等，可以在短時(shí)間內(nèi)為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。