生物素姊妹篇-鏈霉親和素及其衍生物的應(yīng)用

       前情回顧：好物品鑒，生物素及其衍生物產(chǎn)品力薦

 

       上一期我們給大家介紹了目前在生化實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用的生物素-鏈霉親和素結(jié)合系統(tǒng)，以及其中的第一個成員——生物素及其衍生物以及他們的一些常規(guī)的應(yīng)用，今天給大家?guī)�來了該系統(tǒng)中另外一個重要的成員——鏈霉親和素及其衍生物，與生物素類似，鏈霉親和素分子本身也較小，同時也可以與生物活性大分子（例如抗體）廣泛結(jié)合而不會對其功能產(chǎn)生影響，因而得到廣泛的使用。為方便大家的研究工作，今天就給大家?guī)�來了全套的鏈霉親和素及其衍生物相關(guān)產(chǎn)品。

 

       1. 酶標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合物

 

       酶標(biāo)記的鏈霉親和素綴合物通常用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），免疫組化（IHC），免疫印跡（WB）和原位雜交技術(shù)（FISH）。辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（ALP）因其周轉(zhuǎn)率高，穩(wěn)定性高，易于綴合和成本低等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛用作報告標(biāo)簽。

 

       為了最大程度地保留酶和蛋白質(zhì)活性，我們的HRP-鏈霉親和素和AP-鏈霉親和素偶聯(lián)物的標(biāo)記比例為1：1（酶對鏈霉親和素）。顯色，熒光和化學(xué)發(fā)光的底物均可用于這些酶結(jié)合物。

 

 

       FFPE肺腺癌組織中EpCAM的IHC檢測：將人腺癌組織切片與兔抗EpCAM一抗隨后進(jìn)行生物素化的山羊抗兔IgG（H＆L）孵育。然后將樣品與HRP-鏈霉親和素一起孵育，并使用ReadiUse™ Stayright™ Purple（Cat# 45900）進(jìn)行顯色。

 

產(chǎn)品名稱	酶類	規(guī)格	貨號
HRP-鏈霉親和素綴合物	辣根過氧化物酶（HRP）	1mg	16920
AP-鏈霉親和素綴合物	堿性磷酸酶（AP）	1mg	16921

 

       2. HRP底物：
 

產(chǎn)品	檢測方式	Ex（nm）	Em（nm）	規(guī)格	貨號
ReadiUse™ABTS	發(fā)光法	420	——	1L	11001
ReadiUse™TMB	發(fā)光法	650	——	100 ml	11012
ReadiUse™TMB	發(fā)光法	650	——	1L	11003
Amplite™ADHP	熒光法	571	584	25 mg	11000
Amplite™藍(lán)色	熒光法	324	409	25 mg	11005
Amplite™紅色	熒光法	571	584	1000 tests	11011
Amplite™紅外	熒光法	648	668	1 mg	11009
魯米諾	化學(xué)發(fā)光	355	412	1 g	11050

       

       3. AP-鏈霉親和素綴合物及底物：

 

產(chǎn)品名稱	檢測方式	Ex（nm）	Em（nm）	規(guī)格	貨號
pNPP * CAS 4264-83-9 *	比色法	405	——	25 mg	11619
FDP * CAS 217305-49-2 *	熒光法	498	517	5 mg	11600
MUP，二鈉鹽* CAS 22919-26-2 *	熒光法	360	448	25 mg	11610
MUP，二鈉鹽* CAS 22919-26-2 *	熒光法	360	448	10 g	11612
DiFMUP	熒光法	358	450	5 mg	11627
SunRed™磷酸鹽	熒光法	653	661	5 mg	11629
磷酸D-熒光素* CAS 145643-12-3	化學(xué)發(fā)光	——	——	5 mg	12512

 

       4. 熒光鏈霉親和素綴合物

 

       熒光鏈霉親和素偶聯(lián)物廣泛用于熒光成像中，以檢測生物素化的抗體，配體和DNA探針，用于原位雜交技術(shù)（FISH），免疫組織化學(xué)（IHC）和多色流式細(xì)胞術(shù)（FC）。我們提供了一系列完整的熒光鏈霉親和素標(biāo)記，這些熒光素標(biāo)記有iFluor™染料，mFluor™染料，藻膽蛋白和串聯(lián)染料等。我們的iFluor™鏈霉親和素偶聯(lián)物的優(yōu)勢包括：具有異常明亮的熒光，出色的光穩(wěn)定性和對pH值不敏感等特性。

 

       iFluor™鏈霉親和素綴合物

 

       用iFluor™染料標(biāo)記的鏈霉親和素綴合物具有異常明亮和穩(wěn)定的熒光，勝過Alexa Fluor®和其他光譜相似的綴合物。iFluor™鏈霉親和素偶聯(lián)物設(shè)計用于多種細(xì)胞分析和蛋白質(zhì)分析應(yīng)用，包括成像（IF），流式細(xì)胞術(shù)（FC）和熒光免疫印跡。作為提醒，在檢測低豐度靶標(biāo)時避免使用藍(lán)色熒光鏈霉親和素偶聯(lián)物。藍(lán)色熒光染料具有較低的熒光，并且比其他染料具有更高的非特異性背景。

 

 

        HeLa細(xì)胞中α-微管蛋白的免疫熒光染色：將固定和透化的HeLa細(xì)胞中的α-tubulin與兔抗tubulin一抗一起孵育，然后與生物素化的山羊抗兔IgG（H＆L）（Cat# 16794）進(jìn)行孵育，然后加入iFluor™647-鏈霉親和素偶聯(lián)物（Cat# 16966），使用DAPI（Cat# 17507）對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。

 

       ①. 用于成像和流式細(xì)胞術(shù)的iFluor-鏈霉親和素綴合物：

 

產(chǎn)品名稱	Ex / Em（nm）	濾光片組	消光系數(shù)	FQY²	規(guī)格	貨號
iFluor™350鏈霉親和素	344/448	DAPI	20,000	0.95	1 mg	16980
iFluor™405鏈霉親和素	402/425	DAPI	37,000	0.91	1 mg	16982
iFluor™488鏈霉親和素	491/516	FITC	75,000	0.9	1 mg	16985
iFluor™514鏈霉親和素	527/554	TRITC	80,000	0.83	1 mg	16986
iFluor™532鏈霉親和素	543/563	TRITC	90,000	0.68	1 mg	16987
iFluor™546鏈霉親和素	541/557	TRITC	100,000	0.67	200 mg	16958
iFluor™555鏈霉親和素	556/569	TRITC	100,000	0.64	1 mg	16989
iFluor™568鏈霉親和素	568/587	TRITC	100,000	0.57	200 mg	16960
iFluor™594鏈霉親和素	587/603	Texas Red	180,000	0.53	1 mg	16992
iFluor™633鏈霉親和素	638/652	Texas Red	250,000	0.29	1 mg	16995

 

       ②. mFluor™鏈霉親和素偶聯(lián)物用于流式細(xì)胞術(shù)：

 

       用mFluor™染料標(biāo)記的鏈霉親和素偶聯(lián)物具有最小的自發(fā)淬滅，可為流式細(xì)胞儀產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光和穩(wěn)定偶聯(lián)物。mFluor™鏈霉親和素偶聯(lián)物設(shè)計用于通過流式細(xì)胞儀中常用的主要激光線之一（例如405 nm，488 nm，532 nm，561 nm或633 nm激發(fā)光）進(jìn)行最佳激發(fā)。

 

 

       用（紅色）或不用（綠色）1ug / ml生物素標(biāo)記的抗人HLA-ABC的HL-60細(xì)胞的流式細(xì)胞分析，然后添加mFluor™Blue 570-鏈霉親和素偶聯(lián)物（Cat# 16935）。

 

       用于流式細(xì)胞術(shù)的mFluor™鏈霉親和素綴合物：

 

鏈霉親和素綴合物	Ex（nm）	Em（nm）	濾光片組（nm）	貨號
mFluor™紫色450鏈霉親和素	405	444	450/40	16930
mFluor™紫色510鏈霉親和素	408	503	525/50	16931
mFluor™紫540鏈霉親和素	393	536	525/50	16932
mFluor™藍(lán)色570鏈霉親和素	505	564	575/26	16935
mFluor™Green 620鏈霉親和素	522	621	610/20	16938
mFluor™黃色630鏈霉親和素	609	626	610/20	16942
mFluor™Red 700鏈霉親和素	685	704	730/45	16946
mFluor™紅色780鏈霉親和素	629	780	780/60	16948

       ③. 鏈霉親和素APC，PE，PerCP組成串聯(lián)染料偶聯(lián)物用于流式細(xì)胞術(shù)：

 

       鏈霉親和素PE，APC和PerCP偶聯(lián)物通常用于需要高靈敏度但不需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用中，主要是流式細(xì)胞，F(xiàn)ACS，免疫表型和微陣列。藻膽蛋白異常明亮的熒光是由于它們異常高的消光系數(shù)和量子產(chǎn)率。

 

       串聯(lián)染料偶聯(lián)物是將供體藻膽蛋白（例如APC或PE）標(biāo)記到受體iFluor™染料上，后者在較長波長下發(fā)出熒光。使用熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），供體藻膽蛋白吸收的光導(dǎo)致受體的熒光發(fā)射。在流式細(xì)胞儀中，串聯(lián)染料非常適合用于細(xì)胞的多色參數(shù)分析，這是因?yàn)樗鼈兝�用的是單個激發(fā)光源并且其斯托克斯位移（Stokes shifts）非常大。

 

       用于流式細(xì)胞的鏈霉親和素APC，PE，PerCP和串聯(lián)染料偶聯(lián)物：

 

鏈霉親和素綴合物	Ex（nm）	Em（nm）	過濾器組	貨號
RPE鏈霉親和素	564	574	575/26	16900
APC鏈霉親和素	651	660	660/20	16902
PerCP鏈霉親和素	477	678	695/40	16905
RPE-iFluor™647鏈霉親和素	568	666	670/14	16906
RPE-iFluor™750鏈霉親和素	566	778	780/60	16907
APC-iFluor™750鏈霉親和素	651	791	780/60	16908
RPE-Cy7鏈霉親和素	566	778	780/60	16916

 

       ④. 鏈霉親和素-Xtra™綴合物：

 

       鏈霉親和素-Xtra™iFluor™偶聯(lián)物可用于細(xì)胞成像，流式細(xì)胞(FC)和蛋白質(zhì)印跡(WB)等應(yīng)用中生物素化抗體的檢測，從而產(chǎn)生最亮的熒光。與傳統(tǒng)的AlexaFluor®鏈霉親和素綴合物相比，Xtra™iFluor™鏈霉親和素綴合物可對低豐度目標(biāo)蛋白進(jìn)行成像，具有更高的靈敏度和細(xì)節(jié)。

 

       鏈霉親和素-Xtra™綴合物優(yōu)點(diǎn)：

 

       明亮且穩(wěn)定的熒光，無明顯的自發(fā)淬滅

       較高的信噪比：與AlexaFluor®相比，信號改善了3-5倍

       在較寬的摩爾范圍熒光內(nèi)不受pH影響

 

 

用鏈霉親和素-Xtra™IF488和鏈霉親和素-AlexaFluor®488染色的HeLa細(xì)胞的比較

 

       鏈霉親和素-Xtra™綴合物：

 

鏈霉親和素綴合物	Ex（nm）	Em（nm）	濾光片組	貨號
鏈霉親和素-Xtra™iFluor™488	491	516	FITC	46001
鏈霉親和素-Xtra™iFluor™555	556	569	TRITC	46003
鏈霉親和素-Xtra™iFluor™594	587	603	德州紅	46005
鏈霉親和素-Xtra™iFluor™647	654	669	Cy5	46007

 

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