ORF克隆和cDNA克隆在操作技術(shù)上的區(qū)別

最近天氣炎熱，在實驗室的童孩估計有點冒火，本來在這夏困秋乏的季節(jié)，每天都昏昏欲睡，還沒個假期（這也沒辦法，疫情嘛），還要一天天圍著實驗轉(zhuǎn)，做的出來還好，做不出來頭大心塞啊。尤其是新進實驗室的小白，對于實驗的方方面面更是一頭霧水，面對導(dǎo)師的“期待與厚望”，懷著一腔熱血，躊躇滿志，踏上了科研的不歸路。話雖如此，該不懂的還是不懂：

 

比如說，老師給了你整個宇宙那么大的范圍，讓你選擇自己的研究課題，該怎么選課題呢？又比如說導(dǎo)師給了你一個基因，讓你去研究它，要怎么去研究呢？又比如說，導(dǎo)師給了你一個基因，還告訴了你怎么去研究，首先第一步是去把這個基團給克隆一下吧。

 

 

聽到這里，你第一反應(yīng)可能是：啥？把這個基因克隆一下？什么意思？小朋友你是不是有很多問號？不過沒關(guān)系，不懂就問后還是不懂就查資料看文章看文獻嘛，總有解決問題的辦法。

 

小編不才，今天就給實驗小白們捋捋ORF克隆和cDNA 克隆方面的知識吧。

 

一 、相關(guān)概念
 

關(guān)于基因克隆，剛剛踏入實驗室的童孩們可能會比較陌生，不知道何為基因克隆，我們之前只是學(xué)過動物克隆呀。比如說克隆羊多莉，大部分理科生應(yīng)該是有點印象的吧。由克隆羊多莉引出了克隆的概念：

 

克隆 (Clone)：是指生物體通過體細胞進行的無性繁殖，以及由無性繁殖形成的基因型完全相同的后代個體組成的種群。通常是利用生物技術(shù)由無性生殖產(chǎn)生與原個體有完全相同基因的個體或種群。多莉就是一個“copy”出來的動物，與供核的羊媽媽長得一模一樣，基因型也是一模一樣的。因此我們又引出來了概念：基因克隆。

 

 

基因克�。阂步蟹肿涌寺。�是在體外對DNA分子按照既定的目的和方案進行人工重組，將重組分子導(dǎo)入到合適的受體細胞中，使其在細胞中擴增和繁殖，以獲得DNA分子大量復(fù)制，并使受體細胞獲得新的遺傳特征的過程。

 

舉個例子來說，A基因是調(diào)控小鼠褪黑素的分泌的，我想要完全抑制小鼠褪黑素的分泌，觀察褪黑素分泌抑制后小鼠的身體狀況。我們就需要在體外重組這個A基因（使A基因能夠抑制褪黑素分泌），并進行大量的復(fù)制，然后將復(fù)制好的重組的A基因連接到相應(yīng)的表達載體上，然后再將這個載體轉(zhuǎn)入受體細胞中或者小鼠內(nèi)，若實驗成功的話，小鼠的褪黑素會被完全抑制分泌，褪黑素被完全抑制了的小鼠，身體狀況可能會出現(xiàn)相應(yīng)的問題。

 

而拿著一個基因要怎么去分析，去克隆自己想要的片段，就需要根據(jù)自己的實驗需求來進行了。小編今天就給大家講講ORF克隆和cDNA 克隆。

 

cDNA 克隆：是全長轉(zhuǎn)錄本的cDNA克隆，既包含了全長蛋白質(zhì)的編碼序列，也包含 5' 和 3' UTR非編碼序列，不能直接用于轉(zhuǎn)染細胞表達，需要把5’ 及3’ UTR截去然后將表達框連接到構(gòu)建好的表達載體才可以進行轉(zhuǎn)染細胞并表達。

 

ORF克�。阂粋�全長ORF（開放閱讀框）克隆，是指一個插入有編碼全長蛋白質(zhì)的DNA 片斷的質(zhì)粒。該插入DNA 片斷只含有編碼一個全長蛋白質(zhì)的序列（從起始密碼到終止密碼），而不包含有5′或3′端的非翻譯區(qū)（UTRs）或內(nèi)含子。

 

怎么？概念不好理解？沒事，看下面的圖：ORF就是基因的開放閱讀框，沒有5' 和3' UTR序列。是不是感覺很簡單呢？

 

 

cDNA 克隆最主要的用途就是大量復(fù)制，并保存單一cDNA信息，構(gòu)建cDNA文庫，亞克隆等。也由于其5’UTR非編碼區(qū)容易形成復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)，在蛋白質(zhì)翻譯時容易出現(xiàn)問題。因此，cDNA克隆載體必須去掉5' 和3' UTR序列后，再連接到對應(yīng)的表達載體中才能夠在受體細胞中進行表達。

 

而ORF克隆就沒有那么復(fù)雜了，它是cDNA開放閱讀框區(qū)域的序列，無5' 和3' UTR序列，可直接在宿主細胞中進行表達，更為省時省力。所以大家在選擇哪一種克隆的時候，要想好自己要做什么實驗，以及所要考慮的因素比如價格，時間，操作等。

 

二、 相關(guān)產(chǎn)品  

 

看到這里，相信大家對cDNA克隆和ORF克隆有了一定的了解，那接下來就來聊聊相關(guān)的產(chǎn)品吧！

 

1.全長cDNA克隆產(chǎn)品

 

cDNA克�。ㄩL度是指編碼區(qū)）	FL / MFL開頭的cDNA克隆現(xiàn)在基本不銷售，主賣表達克隆
0-1000bp  cDNA克隆	小鼠	質(zhì)粒10μg，及產(chǎn)品說明。不提供菌種和實驗數(shù)據(jù)。
1000-2000bp  cDNA克隆	小鼠
2000bp-4000bp cDNA克隆	小鼠
4000bp以上 cDNA克隆	小鼠
0-1000bp  cDNA克隆	人
1000-2000bp  cDNA克隆	人
2000bp-4000bp cDNA克隆	人
4000bp以上 cDNA克隆	人
部分特殊基因不在促銷范圍之內(nèi)	人、小鼠

 

先要購買的童孩可以根據(jù)自己的物種，轉(zhuǎn)錄本、載體等在Genecopoeia官網(wǎng)上搜索喲~~如果是要定制產(chǎn)品，也可以聯(lián)系武漢艾美捷公司進行咨詢哦。

 

2.ORF克隆相關(guān)產(chǎn)品

 

【1】即用型ORF克隆套裝

 

貨號	基因數(shù)	克隆數(shù)	載體	產(chǎn)品描述
OC-HG-M02	12841	16,096	Receiver-M02 Non-viral	Human whole genome mammalian expression clone sets (no tag)
OC-HG-M13	12,579	13,766	pReceiver-M13 Non-viral	Human whole genome mammalian expression clone sets (with C-terminal Flag tag)
OC-HG-Lv105	12,651	15,799	pReceiver-Lv105 Lentiviral	Human whole genome lentiviral expression clone sets (with no tag)
OC-HG-GC	14,087	18,660	pDONR™ Vector Gateway®	Human whole genome Gateway® PLUS™ shuttle clone sets (no promoter)

 

當然，這只是一小部分產(chǎn)品，即用型的ORF克隆載體也是廠家極力推薦的省時省力的產(chǎn)品哦，這類產(chǎn)品一共有7種克隆載體供您選擇若是想要查詢更多的產(chǎn)品，可以根據(jù)自己的物種，轉(zhuǎn)錄本、載體等在Genecopoeia官網(wǎng)上搜索喲~~如果是要定制產(chǎn)品，也可以聯(lián)系武漢艾美捷公司進行咨詢哦。

 

全方位的表達載體選擇
 

表達載體	種類
ORFEXPRESS™ Gateway® PLUS	1種
大腸桿菌表達克隆載體	15種
哺乳細胞表達克隆載體	48種
慢病毒表達克隆載體	82種
酵母表達克隆載體	3種
麥胚無細胞表達克隆載體	8種
昆蟲細胞表達克隆載體	1種

 

【2】ORFeome

 

GeneCopoeia提供20,000人的ORFeome collaboration克隆,這些構(gòu)建到Gateway® Entry載體的克隆缺少多克隆位點�？蛻艨梢赃x擇載體是否需要終止密碼子。公司還提供小家鼠的ORFeome克隆。

 

【3】人類 及小鼠 Safe Harbor ORF 敲入克隆

 

貨號	產(chǎn)品	產(chǎn)品描述
SH300	人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克�。�DC-C9NU-03）	ORF區(qū)為 Cas9 核酸酶基因，由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 (Puromycin)
SH301	人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克�。�DC-C9NU-04）	ORF區(qū)為 Cas9 核酸酶基因，由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 (Hygromycin)
SH302	人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克�。�DC-C9NU-05）	ORF區(qū)為 Cas9 核酸酶基因，由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 (Neomycin)
SH350	小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克�。�DC-C9NU-06）	ORF區(qū)為 Cas9 核酸酶基因，由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 小鼠 ROSA26 位點。(Puromycin)
SH351	小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克�。�DC-C9NU-07）	ORF區(qū)為 Cas9 核酸酶基因，由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 小鼠 ROSA26 位點。 (Hygromycin)
SH352	小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克�。�DC-C9NU-08）	ORF區(qū)為 Cas9 核酸酶基因，由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 小鼠 ROSA26 位點。 (Neomycin)
多種	人類 AAVS1 或小鼠 ROSA26 ORF 敲入克隆	由 CMV 啟動子啟動 ORF 表達。能將 ORF 或您的目的基因敲入人類 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位點。

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艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等，可以在短時間內(nèi)為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。