Naica數(shù)字PCR技術(shù)對NSCLC患者血漿中EGFR相關(guān)突變檢測的應(yīng)用

非小細胞肺癌（NSCLC）

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，已成為我國城市人口惡性腫瘤死亡原因的第一位。其中，非小細胞肺癌約占所有肺癌的80%，約75%的患者發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期，5年生存率很低。

而非小細胞肺癌中最常見，且有針對性靶向藥物的突變就是“表皮生長因子受體”（EGFR）突變。表皮生長因子受體EGFR基因位于第7號染色體短臂上，屬于酪氨酸激酶受體。其中EGFR酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在18～21外顯子（見下圖）。因此能夠盡早發(fā)現(xiàn)NSCLC患者EGFR突變情況，就可以針對性的進行相關(guān)治療，減輕病人痛苦，延長生命周期。

▲ EGFR常見突變位點

數(shù)字PCR作為第三代PCR技術(shù)，憑借高靈敏度、高精準度，對抑制劑有較強耐受能力等優(yōu)勢正逐漸成為無創(chuàng)血漿檢測-液體活檢的可靠方法。然而，大多數(shù)情況下數(shù)字PCR的低通量和高成本等因素限制了其在臨床檢測方面的應(yīng)用。

艾普拜生物（apexbio）的研發(fā)團隊近日在知名雜志《British Journal of Cancer》（BJC）上發(fā)表了一篇題為Plasma-based early screening and monitoring of EGFR mutations in NSCLC patients by a 3-color digital PCR assay的文章。這篇文章通過高靈敏的數(shù)字PCR技術(shù)對NSCLC患者血漿中的EGFR水平進行突變檢測，并可同時檢測EGFR基因第18-21外顯子的39個突變，極大提高臨床EGFR突變檢測能力，尤其是當(dāng)待測樣本有限時，該方法可從少量樣本中獲得更多基因信息。該雜志影響因子5.791。（詳情請見文末）

研究背景：

使用數(shù)字PCR基于無創(chuàng)血漿的EGFR突變檢測有望成為預(yù)測EGFR-TKI效率的快速、靈敏和可靠的方法。然而，數(shù)字PCR的低通量和高成本限制了其在臨床方面的應(yīng)用。

方法：

研究者設(shè)計了一種數(shù)字PCR方法，可以同時檢測EGFR基因18-21號外顯子的39個突變。為了進行更全面的評估，收集了30例NSCLC患者的回顧性FFPE組織和33例NSCLC患者的血漿進行分析。

結(jié)果：

使用Naica Crystal Digital PCR技術(shù)測得EGFR突變檢測的LOD為0.308 copies/μL，與FFPE組織樣本中的ARMS-PCR檢測結(jié)果相比，33例患者血漿dEGFR39檢測的準確度為87.88%（29/33，95%CI 72.67-95.18%）。在對33例患者進行監(jiān)測時，dEGFR39評估的EGFR突變與治療的客觀反應(yīng)相關(guān)。

此外，dEGFR39比SuperARMS PCR能更早預(yù)測TKI治療后耐藥的NSCLC患者的臨床預(yù)后。用dEGFR39對8例患者的13例樣本進行了鑒定，這些樣本隨時間推移具有T790M突變；對這13個樣本同時進行SuperARMS檢測，僅有9個（69%）被檢出。采用Icotinib治療368天后，在患者P-15的血漿中同時檢測到L858R和T790M突變。然而，SuperARMS PCR未能檢測到T790M突變，此外，直到121天CT結(jié)果才有明顯的進展。同樣，在患者P-25中，dEGFR39結(jié)果顯示在TKI治療251天后，19Del和T790M的突變豐度增加，比影像學(xué)進展提前43天。在患者P-23中，也出現(xiàn)了相似現(xiàn)象。綜上所述, dEGFR39 檢測T790M突變的發(fā)生要早于SuperARMS PCR和CT成像，這一點可在診斷和預(yù)后中發(fā)揮重要作用。

結(jié)論：

該結(jié)果表明，dEGFR39分析是可靠，靈敏的，并可極大的節(jié)省檢測成本。此方法有助于對EGFR突變進行多重分析，以進行TKI治療后的精密監(jiān)測和伴隨診斷，尤其適用于組織活檢樣本較少的患者。

Naica數(shù)字PCR平臺

法國Stilla Technologies公司的Naica數(shù)字PCR技術(shù)在進行核酸檢測時具有獨特的優(yōu)勢。系統(tǒng)利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的唯一耗材。樣品通過毛細通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進入2D芯片中。3色熒光檢測儀器，整個流程只需要兩個半小時，并可進行數(shù)據(jù)的質(zhì)控和結(jié)果追溯分析，獲得的數(shù)據(jù)真實可靠。

期刊介紹：

British Journal of Cancer于1947年開始出版，該雜志包括對整個癌癥領(lǐng)域的研究，包括從分子和機理研究到細胞生物學(xué)，病理學(xué)，實驗療法，流行病學(xué)和臨床研究的描述，是被引用次數(shù)最多的癌癥研究雜志之一，在臨床癌癥研究方面有重大貢獻。

原文鏈接: https://doi.org/10.1038/s41416-020-1024-2