支原體污染對細胞培養(yǎng)的影響與解決方法
很多科研小伙伴在細胞培養(yǎng)的過程中，總是出現(xiàn)各種各樣的情況和問題，比如，細胞漏液、不貼壁、細胞有黑點、支原體污染、不增殖、細胞老化變形、復蘇存活率低等等，這些問題對于參與細胞實驗的小伙伴來說，是急需解決的大問題，好不容易買來的細胞，剛剛進行培養(yǎng)傳代，就出現(xiàn)了以上的各種問題，這樣的情況通常都會令小伙伴們無比抓狂。
因為想要開展后續(xù)實驗，培養(yǎng)細胞往往是第一要事，細胞養(yǎng)不好，后續(xù)實驗就無法進行。
如果排除了其他試劑選擇不當、細胞株老化、復蘇存活率低等原因，而仍有上述一種或幾種情況，那么還有一種情況發(fā)生，那就是你的細胞可能被污染了。所以不管發(fā)生哪種類型的污染情況都會造成相同的結果，就是實驗需要重新做，這樣不僅增加了實驗成本，而且又浪費工作時間，還增加了實驗的重復性。
而且以污染細胞和未污染細胞為基礎進行實驗時，有可能得到的實驗結果完全不同。更為嚴重的是，如果你所研究的細胞是另外一種細胞的話，那所做的所有工作可能會一文不值。
那么為什么一定要進行支原體污染清除呢？
支原體污染清除要求
從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養(yǎng)都要進行支原體檢測。以細胞為載體的科學研究，如果不能保證所用的細胞無支原體污染，則實驗結果很可能是極端不可靠甚至是完全錯誤的！
支原體直徑約為0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體污染是細胞培養(yǎng)領域的一個世界性問題，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。
支原體可通過細胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。
電鏡下的支原體
支原體在光學顯微鏡下不可見，一般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸，影響細胞生長速率，促進代謝物積累，改變細胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細胞因子表達，改變被污染細胞的基因表達譜，誘導染色體畸變。
支原體的危害
支原體清除服務包括以下幾個方面：
服務對象
1. 實驗室的種子細胞，如從ATCC、JCRB、DMSZ等國外權威細胞庫采購的珍貴細胞系；
2. 組織珍貴的原代細胞；
3. 需要進行基因編輯的細胞；
4. 各類干細胞（含iPS細胞）；
5. 稀有細胞。
服務內(nèi)容
1.根據(jù)客戶提供的細胞名稱、細胞代次、細胞類型制定細胞的支原體清除方案；
2. 細胞STR鑒定（選做）；
3. 支原體PCR法檢測支原體污染程度；
4. 細胞的支原體清除，一般污染單一支原體的清除時間為2周左右，感染多種支原體且非常嚴重的細胞，清除時間需要延長，約3-4左右；
5. 2-3周后，再次進行支原體檢測，如果細胞支原體清除干凈，將換為支原體預防培養(yǎng)方案，繼續(xù)維持一周左右時間。如未清除干凈，則適當延長1-2周繼續(xù)清除頑固支原體，2周后再次進行復檢。
服務周期與價格
送樣要求
1. 復蘇細胞（充液運輸）：生長狀態(tài)良好的細胞，待達70%-80%匯合時，去掉舊培養(yǎng)液換入新培養(yǎng)液，量要達到培養(yǎng)瓶的頸部（過滿易污染），保留少許空間，旋緊瓶蓋，避免空氣過多運輸中氣泡運動易使細胞脫落。
2. 凍存細胞（干冰運輸）：將干冰提前置于塑料泡沫盒中，以最快的速度將細胞凍存管從液氮轉入干冰中，用膠帶封好泡沫盒，最好在外面加套一層紙盒，延緩干冰揮發(fā)。
注：根據(jù)距離選擇泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小于 50mm，內(nèi)部空間不小于200× 200× 200mm，放入足量干冰。
支原體清除案例
如上圖1所示，左側為支原體污染的MCF-7細胞，右側為支原體清除后的MCF-7細胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細胞間隙間黑點明顯減少，細胞邊緣清晰，狀態(tài)良好。
如上圖2所示，左側為支原體污染的Hep G2細胞，右側為支原體清除試劑處理的Hep G2細胞。左側有支原體污染的細胞樣品可以觀察到細胞核周圍微粒狀或絲狀藍色熒光。支原體污染嚴重的細胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍色熒光。右側細胞支原體污染被清除干凈，僅觀察到細胞核的藍色熒光，證明支原體已被清除干凈。
注意事項
1. 由于各個實驗室細胞培養(yǎng)體系不同，且更換體系細胞會需要一段時間的適應，故本服務需客戶自行提供足量的培養(yǎng)體系；
2. 根據(jù)客戶需求，STR鑒定服務為選做項目，賽百慷生物承諾對于支原體清除服務細胞進行單獨隔離培養(yǎng)，客戶為保證實驗嚴謹性，可選擇我司進行STR鑒定服務；
3. 由于細胞隨時可能會存在交叉的風險，只認可我司接收細胞后第一時間進行的STR鑒定結果；
提供結果
原始支原體PCR結果圖片和無支原體污染的細胞（根據(jù)客戶需要選擇充復蘇/凍存發(fā)貨形式）。
保密承諾
我公司鄭重承諾：客戶提供產(chǎn)品的檢測信息與數(shù)據(jù)，履行保密義務，未經(jīng)客戶許可，不得擅自公開發(fā)表或使用，不得泄露給第三方。
支原體清除試劑
另外，賽百慷還提供可有效抑制并清除多種支原體的支原體清除劑，包括 Mycoplasma orale, M. arginini, M. hyorhinis和Acholeplasma laidlawii。經(jīng)過大量實驗驗證對細胞幾乎沒有毒性，對細胞的各種檢測沒有干擾。通常在細胞培養(yǎng)液中加入本試劑約1至2周即可有效抑制和清除支原體。
iCell支原體清除劑為透明淡黃色液體。具體的工作濃度因支原體的種類不同而有所不同，在實際防止支原體污染或清除支原體污染時需摸索適當?shù)墓ぷ鳚舛取?/p>
支原體清除試劑經(jīng)過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，對細胞無害，對清除支原體污染效果顯著，能夠很好的抑制和殺滅支原體。
所以，科研小伙伴們?nèi)绻銈兪掷镎滟F的細胞被支原體污染了，沒有辦法做實驗，沒有其他地方采購，千萬不要扔掉，交給我們，相信我們，我們會還你一個狀態(tài)好又無污染的好細胞，而且我們保證，不成功不收費的哦~~~
