如何掃描出高質(zhì)量的數(shù)字病理切片操作指導(dǎo)原則

目前許多基層醫(yī)院都購(gòu)置了數(shù)字病理掃描儀（WSI掃描儀），但不是把病理切片放到WSI掃描儀上就自動(dòng)地得到診斷質(zhì)量的數(shù)字切片圖像，掃描前的固定、染色等制片許多步驟會(huì)極大地影響隨后的掃描質(zhì)量，甚至導(dǎo)致掃描失敗，這與您使用什么品牌的掃描儀無(wú)關(guān)。你想從你的病理切片掃描出高質(zhì)量的圖像，以下注意事項(xiàng)可以幫助您使用好WSI掃描儀  

1. 組織準(zhǔn)備 高質(zhì)量制備的組織至關(guān)重要的，最好的數(shù)碼掃描儀也無(wú)法彌補(bǔ)樣本質(zhì)量差等不足。組織準(zhǔn)備的多個(gè)步驟可能會(huì)影響最終的圖像掃描。

• 切片-WSI掃描儀的聚焦范圍比傳統(tǒng)顯微鏡小，標(biāo)準(zhǔn)組織厚度（3–5μm）將給出最佳結(jié)果。對(duì)于厚切片，可能需要進(jìn)行多平面（z-stack）掃描。
• 染色-染色強(qiáng)度的控制至關(guān)重要，過(guò)深、過(guò)淺將使掃描儀更難自動(dòng)識(shí)別組織，常常需要更多的人工操作。
• 貼片——與傳統(tǒng)顯微鏡一樣，數(shù)字WSI掃描儀在平的組織表面工作效果最好。盡最大努力避免組織折疊，才能對(duì)焦清晰。
• 蓋玻片-掃描切片，最好使用玻璃蓋玻片，塑料蓋玻片可能會(huì)隨著時(shí)間的推移而扭曲從而影響掃描儀的聚焦。與傳統(tǒng)顯微鏡一樣，確保蓋玻片下沒(méi)有氣泡，以防止掃描失焦。

 
2. 切片檢查和準(zhǔn)備

• 為了提高掃描的成功率和圖像質(zhì)量，請(qǐng)務(wù)必在掃描前檢查并清潔切片。
• 切片上的標(biāo)簽、膠帶都有可能影響平整度妨礙掃描操作。用超細(xì)纖維擦鏡布小心地擦拭切片，可以有效地清除上下表面的灰塵、水漬或指紋。對(duì)于不易清除的污漬，用水或酒精溶液將其浸濕后再擦拭清潔。
• 檢查切片有無(wú)裂紋或缺口，尤其是切片的4個(gè)角處。任何松動(dòng)的玻璃碎片都可能在掃描過(guò)程中脫落并損壞掃描機(jī)構(gòu)。
• 等到切片完全干燥后再裝入掃描儀，以免殘留液體進(jìn)入掃描儀內(nèi)。
• 確保將切片平放在掃描儀機(jī)架或托盤(pán)中，并固定好。如果掃描過(guò)程中切片不平整，則很可能在掃描中出現(xiàn)大面積失焦區(qū)域。切片底部貼標(biāo)簽可能導(dǎo)致切片放置不平整，請(qǐng)確保這些標(biāo)簽僅粘貼到切片朝上那一面。。

 
3. 掃描切片
每家WSI掃描儀都有自己的工作流程和要求。然而，為了掃描出好的圖像，還是有一些共同的原則要遵循：

• 掃描儀應(yīng)能自動(dòng)識(shí)別所有組織、鑒別所有的非組織物體如標(biāo)簽，手工標(biāo)注痕跡。組織染色過(guò)深、過(guò)淺、過(guò)多灰塵、手工標(biāo)注痕跡都會(huì)影響組織區(qū)域的準(zhǔn)確檢測(cè)。有可能的話，在高分辨率掃描之前，用制片質(zhì)量不佳切片的測(cè)試組織檢測(cè)，以避免以后需要重新掃描。
• 聚焦應(yīng)該是自動(dòng)的，并且預(yù)對(duì)焦的焦點(diǎn)應(yīng)該均勻地分布在整個(gè)組織上。如果一個(gè)區(qū)域掃描時(shí)失焦，請(qǐng)嘗試手動(dòng)在這個(gè)區(qū)域設(shè)置對(duì)焦點(diǎn)。
• 避免將焦點(diǎn)設(shè)置到蓋玻片上或下面有碎屑、氣泡或其他缺陷的區(qū)域。這些可能會(huì)導(dǎo)致掃描儀聚焦在不正確的掃描平面上，導(dǎo)致掃描失焦。
• 對(duì)于高倍率的油鏡掃描，確保在掃描前加了足夠的油，以防止掃描過(guò)程中物鏡變干，從而在掃描圖像上留下“條紋”偽影。同時(shí)也要防止過(guò)多的油會(huì)滲到蓋玻片下，在掃描時(shí)留下“光滑”的外觀，導(dǎo)致細(xì)胞邊緣的對(duì)比度變差。有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)員正式油鏡掃描前的先進(jìn)行一個(gè)快速的測(cè)試掃描會(huì)很有幫助。掃描結(jié)束后，一定要清理掉殘留油。

 
4. 質(zhì)量控制（QC）
盡管做了很多努力，但也不能保證每次掃描結(jié)果都能接受。雖然每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制過(guò)程都會(huì)有所不同，也應(yīng)該始終遵循您所在機(jī)構(gòu)的質(zhì)量控制要求，不過(guò)，通過(guò)圖像查看器用以下方法，可以讓您快速和高效的進(jìn)行QC。

• 先在低倍率（如4倍）下檢查整個(gè)數(shù)字切片，檢查是否有可見(jiàn)的失焦區(qū)域或錯(cuò)位。
• 在高倍率、高分辨率圖像條件下，在組織切片的最寬處以單個(gè)水平路徑進(jìn)行查看，一個(gè)個(gè)視野基層，主要檢查是否有細(xì)微的失焦或細(xì)微的錯(cuò)位。在垂直方向上，從組織的最寬處邊緣到另一側(cè)邊緣，以一條完整的直線進(jìn)行檢查，每次一個(gè)視野，主要看是否有任何失焦的區(qū)域。在高倍鏡下抽檢切片的幾個(gè)區(qū)域，特別是組織厚度不同或載玻片有缺陷的區(qū)域，這些區(qū)域是最有可能失焦的區(qū)域。

遵循這些簡(jiǎn)單的指導(dǎo)原則，就能幫助您生成更高質(zhì)量的數(shù)字圖像，永久保存，隨時(shí)查看、共享和分析。