數(shù)字PCR在取樣困難病人的血漿糞便尿液等復(fù)雜樣本新冠病毒檢測(cè)的應(yīng)用

截止目前，針對(duì)疫情相關(guān)人群做新冠肺炎篩查時(shí)，主要采用鼻咽拭子核酸檢測(cè)，原因是方便快捷，適合大規(guī)模篩查。但是，對(duì)于一些無(wú)癥狀感染者或輕癥感染者來(lái)說(shuō)，感染后病情恢復(fù)得很快，可能3至5天咽部核酸就檢測(cè)不到了。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，一部分感染者糞便或肛拭子核酸陽(yáng)性的持續(xù)時(shí)間比上呼吸道持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。因此，增加肛拭子等復(fù)雜樣本的核酸檢測(cè)能夠提高感染者檢出率，減少漏診。

日前，湖南省疾控研究人員對(duì)已經(jīng)確診的3例新型冠狀病毒肺炎患者不同時(shí)間的全血、尿液、糞便標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行qPCR和Naica數(shù)字PCR（cd-PCR）的核酸檢測(cè)，并比較了兩種方法檢測(cè)各類樣本中2019-nCoV的差異性，提出改進(jìn)2019-nCoV核酸檢測(cè)的綜合策略，為核酸檢測(cè)陰性患者提供更多診斷支持。

本實(shí)驗(yàn)中數(shù)字PCR在病例發(fā)病早、中、晚期標(biāo)本中均能檢測(cè)到陽(yáng)性微滴，而qPCR漏檢了發(fā)病小于5天的標(biāo)本，檢測(cè)到的陽(yáng)性核酸均以中晚期為主。這也解釋了受檢測(cè)方法靈敏度的局限性，目前大部分假陰性患者都處于疾病發(fā)展的早期。此外，在本次實(shí)驗(yàn)中數(shù)字PCR在重癥病例的三種標(biāo)本中均測(cè)到陽(yáng)性微滴，但因?yàn)檠�、尿和可疑糞便的標(biāo)本病毒載量偏低，qPCR檢測(cè)均為陰性。

總之，數(shù)字PCR技術(shù)可以有效克服qPCR靈敏度不足的難題，捕捉到病毒載量較低的血液、尿液和可疑的糞便或肛拭子標(biāo)本，是qPCR的有益補(bǔ)充，為幫助臨床醫(yī)生準(zhǔn)確判斷早期感染及患者是否真正痊愈起到了積極的作用，對(duì)2019-nCoV的長(zhǎng)期監(jiān)控有重要的意義。

Naica數(shù)字PCR技術(shù)進(jìn)行新冠病毒檢測(cè)，依托高靈敏度、全封閉、判讀快捷等優(yōu)勢(shì)，可應(yīng)用于以下場(chǎng)景：

1. 低濃度樣本檢測(cè)，如ct值>37個(gè)循環(huán)的樣本，ct值為零的高危密接樣本，排除假陰性結(jié)果；

2. 醫(yī)院樣本的準(zhǔn)確復(fù)核；

3. 出院標(biāo)準(zhǔn)的確證；

4. 陽(yáng)性病人的出院后定期跟蹤檢測(cè)；

5.取樣困難病人的復(fù)雜樣本檢測(cè)：血漿、糞便、尿液等；

6.捐獻(xiàn)庫(kù)、樣本庫(kù)、血庫(kù)中樣本新冠篩查；

7.群采檢測(cè)和單采群檢，提高日檢測(cè)能力，篩選靈敏度高。