首先,需要下載一個最新版的curve Exert1.4軟件
準(zhǔn)備就緒。。¢_始我們的教(biao)學(xué)(yan)
1.啟動“Curve Expert1.4”。
2.X軸輸入所對應(yīng)的濃度值,Y軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值。如圖↓
3.單擊[運(yùn)行]按鈕,出現(xiàn)如下對話框。
4.單擊[ok]按鈕,出現(xiàn)如下兩個對話框,關(guān)閉下面一個對話框。
5.在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱,從“1”開始依次點(diǎn)擊曲線名稱,在右下角會出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線。
6.根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊,出現(xiàn)如下對話框。
注意:選擇系數(shù)(即“r”值)最好的曲線方程來進(jìn)行運(yùn)算。在上面的對話框右上角有“r”值,當(dāng)“r”值越接近1,擬合度越好。
7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵或者右鍵單擊選擇[analyze],出現(xiàn)如下對話框。
8.Y軸輸入對應(yīng)的樣本OD值,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實(shí)際含量。
9.如果出現(xiàn),可以調(diào)節(jié)相應(yīng)的值,即根據(jù)預(yù)測的X結(jié)果,選擇附近的數(shù)值即可。
注意:標(biāo)本稀釋了N倍,運(yùn)算出的數(shù)值應(yīng)再乘以N
10.如想得到ELISA擬合曲線的方程,可在步驟6的對話框空白處右擊,選擇”Information”,得到如下對話框:點(diǎn)擊“Copy”。
11.在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù):
MMF Model:y=(a*b+c*x^d)/(b+x^d)
Coefficient Data:
a=5.02803575349E-002
b=3.54849086120E+002
c=2.67845070065E+000
d=1.19812203348E+000