數(shù)字PCR在病原微生物檢測(cè)不可不知的操作技巧

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病原體（pathogens）是指可造成人或動(dòng)植物感染疾病的微生物（包括細(xì)菌、病毒、立克次氏體、真菌）、寄生蟲(chóng)或其他媒介（微生物重組體包括雜交體或突變體）。（來(lái)源：百度百科）

傳統(tǒng)的病原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)方法是“涂片鏡檢法+分離培養(yǎng)法”，但這種方法耗時(shí)長(zhǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)一般需要1-3天，真菌培養(yǎng)一般需要1-3周，對(duì)于發(fā)病較快結(jié)核桿菌等則需要1個(gè)月，同時(shí)還存在鏡檢和分離培養(yǎng)等方法還不易對(duì)相關(guān)病原體進(jìn)行分型檢測(cè)的問(wèn)題，特別是臨床上對(duì)于急性感染疾病一般無(wú)法用這種方法在就診前獲得檢測(cè)結(jié)果。

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隨著技術(shù)的發(fā)展，陸續(xù)出現(xiàn)了分子診斷技術(shù)、免疫學(xué)檢測(cè)方法和化學(xué)法檢測(cè)等病原體檢測(cè)手段，目前使用最多的是分子診斷技術(shù)。第三代PCR技術(shù)-數(shù)字PCR，作為分子診斷領(lǐng)域的佼佼者，在病原體核酸檢測(cè)方面彰顯出巨大優(yōu)勢(shì)：

1、擺脫病原微生物檢測(cè)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的依賴

病毒等微生物的載量對(duì)于闡釋疾病病程，后續(xù)治療及療效評(píng)估是至關(guān)重要的， qPCR技術(shù)的最大瓶頸在于需要依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線，而且擴(kuò)增效率的差異會(huì)直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或者不同實(shí)驗(yàn)室之間的熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果的偏差。數(shù)字PCR基于單分子層面的檢測(cè)可以擺脫對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的依賴，且不受PCR抑制物的影響，尤其是在缺乏標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)項(xiàng)目中，數(shù)字PCR可用于直接定量病原微生物的拷貝數(shù)。

2、靈敏度高

在病原微生物的檢測(cè)方面，數(shù)字PCR利用其靈敏度高的特點(diǎn)，對(duì)各種樣品中的病原微生物展開(kāi)廣泛的研究，可以用于早期診斷和用藥的低拷貝病毒的監(jiān)控。如人類免疫缺陷病毒（HIV）抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療過(guò)程中病毒殘留的監(jiān)控；抗甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染監(jiān)控。（詳細(xì)內(nèi)容見(jiàn)文末相關(guān)文章鏈接）

3、大大縮短報(bào)告周期

使用數(shù)字PCR檢測(cè)臨床標(biāo)本無(wú)需經(jīng)過(guò)病原微生物培養(yǎng)過(guò)程，大大縮短了報(bào)告周期，使快速檢測(cè)潛在的病原微生物成為可能，且利于從大量不同的背景核酸中檢出病原微生物，對(duì)于感染性疾病的診斷和控制意義重大，有助于及時(shí)減少患者服用無(wú)效藥物的數(shù)量，及早采用其他備用藥物。

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