《美國藥典》解析：BLI技術(shù)正式列入（USP-NF）

 
被列入藥典方法是每種技術(shù)夢寐以求的成就�；�于生物層干涉技術(shù)（BLI）的Octet儀器自2006年第一臺原型機(jī)的問世，憑借其高通量和簡單易用的優(yōu)點(diǎn)，迅速獲得了廣大藥物研發(fā)企業(yè)和科研工作者的青睞。經(jīng)過多年的技術(shù)積累和進(jìn)步，Octet儀器以及傳感器的精度和穩(wěn)定性越來越好，在親和力檢測和濃度測定方面大放異彩，終于獲得各國評審機(jī)構(gòu)以及藥典委員會的認(rèn)可。在2020年底作為非標(biāo)記檢測方法的一種被列入《美國藥典》檢測分子相互作用的方法之一【1】，同時也被收入了藥典有關(guān)Fc介導(dǎo)的效應(yīng)功能活性評價方法的章節(jié)【2】。為此，Octet等待了15年！
 
  
Fc即可結(jié)晶片段(Fragment Crystallizable)。用木瓜蛋白酶水解IgG（免疫球蛋白）分子，可得到兩個Fab和一個Fc段。該片段能與效應(yīng)分子和效應(yīng)細(xì)胞上的Fc受體結(jié)合，使得抗體藥物產(chǎn)生抗體依賴細(xì)胞毒性作用 (ADCC)， 補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性作用（CDC）以及抗體依賴細(xì)胞吞噬作用（ADCP），也會影響抗體藥物的半衰期。這些受體包括FcγR（I, IIa, IIb, IIIc, IIIa, IIIb）, C1q和FcRn。 
 
各國有關(guān)生物大分子藥物活性檢測的指導(dǎo)原則都包含了Fc介導(dǎo)的效應(yīng)功能活性評價，這是生物大分子藥物質(zhì)量屬性研究的重要一環(huán)。  
    
1108章節(jié)中關(guān)于BLI的描述：包括BLI技術(shù)的介紹，優(yōu)缺點(diǎn)以及實(shí)驗(yàn)設(shè)計要素等。

優(yōu)點(diǎn)
非標(biāo)記，高通量，能提供動力學(xué)和濃度測定數(shù)據(jù)，半自動化
 
缺點(diǎn)
需要特定的設(shè)備和傳感器，方法比較難轉(zhuǎn)移
 
實(shí)驗(yàn)設(shè)計的考慮點(diǎn)

1	需要選擇合適的傳感器和實(shí)驗(yàn)方向（固化受體還是抗體藥物）
2	通常FcγRs與抗體的結(jié)合比較弱，需要提高分析物的濃度
3	傳感器上過量的固化會導(dǎo)致由于空間位阻、親合作用、傳質(zhì)作用以及非特異性等原因?qū)е碌臄?shù)據(jù)失真；而固化量太少又會導(dǎo)致信號的信噪比較高。
4	緩沖液條件需要優(yōu)化，以盡可能降低非特異性，同時獲得最佳結(jié)合條件。
5	結(jié)合步驟可以適當(dāng)縮短，以減少次級結(jié)合的發(fā)生。

 
  BLI技術(shù)寫入藥典證明了Octet分子互作分析系統(tǒng)有著良好的性能和表現(xiàn)，很多生物制藥企業(yè)早已開始用Octet測試Fc受體/C1q與抗體藥物的親和力。中國食品藥品檢定研究院的生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究實(shí)驗(yàn)室早在2016年就應(yīng)用Octet系統(tǒng)建立了類似的檢測方法，并發(fā)表了多篇文章。點(diǎn)擊這里查看：中檢院教你如何評價原研藥與類似藥的相似性。
 
   
文中也提到采用高質(zhì)量的Fc受體原料是成功建立親和力檢測實(shí)驗(yàn)的前提。這些原料生產(chǎn)公司本身也是用Octet系統(tǒng)來檢測其產(chǎn)品的質(zhì)量。參考他們的質(zhì)檢方法，往往可以幫助用戶更快速的建立自己的檢測方法！
  兩家都是用HIS1K傳感器固化CD16a，與不同濃度的抗體結(jié)合（廠家1是 Her2抗體，廠家2是Rituximab）
 

陳老濕曰
BLI技術(shù)被列入藥典，對于Octet來說是一個里程碑事件！說明藥物標(biāo)準(zhǔn)制定機(jī)構(gòu)以及評審機(jī)構(gòu)對BLI技術(shù)的充分肯定。這是建立在BLI技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用并獲得良好口碑的基礎(chǔ)上！BLI技術(shù)的成功不僅是Octet系統(tǒng)的性能體現(xiàn)，也得益于多年來眾多Octet用戶和以陳老濕為代表的應(yīng)用科學(xué)家們對BLI技術(shù)的成功開發(fā)和應(yīng)用。陳老濕必須驕傲一把，哈哈~~~當(dāng)然，我們會遵循嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)研究的態(tài)度，為大家提供更好的支持。
 


-參考文獻(xiàn)-
【1】USP<1105>IMMUNOLOGICAL TEST METHODS—SURFACE PLASMON RESONANCE
【2】USP<1108> ASSAYS TO EVALUATE FRAGMENT CRYSTALLIZABLE (FC)-MEDIATED EFFECTOR FUNCTION
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