CCK-8試劑盒在細(xì)胞增殖檢測(cè)的中的應(yīng)用

什么是細(xì)胞增殖檢測(cè)

細(xì)胞增殖是細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下，通過(guò)DNA復(fù)制等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過(guò)程。在細(xì)胞增殖中，新細(xì)胞的產(chǎn)生過(guò)程影響著體內(nèi)所有組織的發(fā)育、生長(zhǎng)和維持，同時(shí)，它也被嚴(yán)格調(diào)控著，以防失控的細(xì)胞分裂（可出現(xiàn)在各種癌癥）導(dǎo)致腫瘤的形成和器官功能的破壞。正因?yàn)榧?xì)胞增殖對(duì)生物活動(dòng)的這種廣泛影響，其在各種環(huán)境中的準(zhǔn)確評(píng)估變得十分重要。

                                                           腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化過(guò)程

細(xì)胞增殖是通過(guò)細(xì)胞分裂引起的細(xì)胞數(shù)量增加，在整個(gè)生命周期中對(duì)正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細(xì)胞會(huì)處于持續(xù)增殖狀態(tài)，如皮膚和骨髓細(xì)胞，但許多成人組織中的細(xì)胞會(huì)處于非增殖狀態(tài)，只有在損傷或感染時(shí)，才能被激活來(lái)補(bǔ)充細(xì)胞。與之相反，細(xì)胞周期關(guān)鍵基因突變引起的細(xì)胞增殖失調(diào)是各類癌癥的標(biāo)志，會(huì)造成腫瘤異常的不受控制的生長(zhǎng)。

增殖檢測(cè)一般用于分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及活性，細(xì)胞增殖檢測(cè)是細(xì)胞分析和藥物研發(fā)中經(jīng)常會(huì)使用的手段。目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)，分子生物學(xué)，藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。


細(xì)胞增殖檢測(cè)的方法

一類是直接法，這種方法就是直接測(cè)定進(jìn)行分裂的細(xì)胞數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力，另一類是間接的方法，我們通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的活力來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。

常見(jiàn)的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法包含：直接計(jì)數(shù)法；MTT檢測(cè)法；MTS檢測(cè)法；CCK-8檢測(cè)法；3H-TdR滲入法；Brdu/EdU檢測(cè)法；CFSE檢測(cè)法；刃天青還原法；活細(xì)胞蛋白酶底物法/ATP法等。

                                                                     常見(jiàn)檢測(cè)方法對(duì)比
其中，MTT比色是一種目前被廣泛采用的檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和存活的方法。


CCK-8試劑盒

CCK-8試劑盒全稱Cell Counting Kit-8，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

                                                               CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性原理圖
其工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
CCK-8被經(jīng)常用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)等。
優(yōu)點(diǎn)：
· 酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾；
· 靈敏度高，可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；
· 細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最佳測(cè)定時(shí)間；
· 檢測(cè)時(shí)間短；
· 重復(fù)性優(yōu)于MTT法；
· 操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力，省去了洗滌細(xì)胞，適合批量樣品檢測(cè)；
· 檢測(cè)試劑很穩(wěn)定。




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