高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH小鼠模型構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)應(yīng)用

疾病動(dòng)物模型是研究人類疾病發(fā)生發(fā)展機(jī)制、藥物篩選及療效評(píng)價(jià)必不可少的工具，好的疾病動(dòng)物模型可以加快新藥的研發(fā)速度。你還在為不知道選擇什么小鼠模型發(fā)愁嗎？你還在為造模發(fā)愁嗎？賽業(yè)生物新欄目《每周一鼠》，每周更新，為大家講解一個(gè)疾病小鼠模型的故事，希望對(duì)大家了解不同的疾病小鼠模型有所幫助。今天和大家見面的是高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH小鼠模型。

給予動(dòng)物高脂、高糖飼料喂養(yǎng)建立的脂肪肝模型，其主要發(fā)病機(jī)制是營養(yǎng)過剩，食物中脂類、膽固醇和（或）糖類過量，無法完全吸收利用，脂類堆積于肝而引發(fā)脂肪肝，進(jìn)一步出現(xiàn)肝炎性改變及纖維化。該模型與人類非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）相似，是最常見的NAFLD動(dòng)物模型。

賽業(yè)生物通過高脂高膽固醇高果糖飼料（GAN）喂養(yǎng)構(gòu)建的NASH小鼠模型，可作為闡明非酒精性脂肪肝的病理生理機(jī)制以及新藥的開發(fā)的動(dòng)物模型。

構(gòu)建策略
使用Gubra-Amylin NASH (GAN) 飼料，即高脂高膽固醇高果糖飼料（40%脂肪供能、20 %果糖和2%膽固醇）喂養(yǎng)小鼠26周以上（一般16周開始出現(xiàn)脂肪變性，26周形成NASH，26~32周誘導(dǎo)出纖維化）。

模型驗(yàn)證

1  體重及血生化檢測

圖1. 使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH模型的體重及血生化檢測。將野生型C57BL/6雄鼠隨機(jī)分為2組，每組10只，分別用標(biāo)準(zhǔn)飼料（control組）和高脂、高膽固醇、高果糖飼料（NASH組）喂養(yǎng)，在不同時(shí)間點(diǎn)檢測各項(xiàng)指標(biāo)：(A)體重；（B）6h空腹血糖值；（C）血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）濃度；（D）血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）濃度；（E）血清總膽固醇（TC）濃度。數(shù)據(jù)以Mean±SEM呈現(xiàn)。使用Two-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。ns: not significant, *: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001, ****: p<0.0001。

結(jié)果顯示：建模30周時(shí)，NASH組小鼠的體重、6h空腹血糖值、血清中ALT、AST和TC濃度均顯著高于對(duì)照組。

2  肝重量、肝重占體重的比值、肝組織體積檢測

圖2. 使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH模型的肝組織檢測。從造模后第16周開始，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取2只同批次對(duì)照組和NASH組小鼠進(jìn)行解剖觀察，檢測各項(xiàng)肝指標(biāo)：（A）肝重量;（B）肝重/體重；（C）飼養(yǎng)26周后小鼠的肝組織。數(shù)據(jù)以Mean±SEM呈現(xiàn)。使用Two-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。ns: not significant, *: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001, ****: p<0.0001。

結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，NASH組小鼠的肝重量、肝重占體重的比值、肝組織體積均有升高。

3  肝組織病理切片及NAS評(píng)分

圖3. 使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH模型的病理切片及NAS評(píng)分。

飼養(yǎng)26周后小鼠的肝組織病理切片：（A）正常對(duì)照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心，呈放射狀排列,無肝細(xì)胞氣球樣變或炎癥細(xì)胞浸潤；（B）NASH組小鼠的肝組織小葉結(jié)構(gòu)紊亂，大泡性脂滴占了總細(xì)胞的2/3以上，出現(xiàn)嚴(yán)重的脂肪變性, 局部以浸潤為主的局灶壞死性炎癥；紅色箭頭：脂肪變性；藍(lán)色箭頭：氣球樣變；（C）NASH組小鼠的肝纖維化可以達(dá)到F2級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（moderate中度纖維化）；紅色箭頭：纖維化 ；（D）NAS評(píng)分。數(shù)據(jù)以Mean±SEM呈現(xiàn)。使用Two-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。ns: not significant, *: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001, ****: p<0.0001。Scale bar = 100 µm。

肝組織病理切片結(jié)果顯示：造模26周后，與對(duì)照組相比，NASH組小鼠的肝組織出現(xiàn)了明顯的脂肪變性、氣球樣變與纖維化。此外，NASH組小鼠的NAS評(píng)分從造模后第16周開始，均達(dá)到了5分，與對(duì)照組差異顯著，NASH小鼠造模成功。

除了飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝小鼠模型，賽業(yè)生物還可為您提供多種非酒精性脂肪肝小鼠模型（比如 化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)模型、 基因編輯模型、復(fù)合模型）及表型分析服務(wù)，如有需要，可以聯(lián)系我們?yōu)槟�的研究量身定制�?/strong>