CELLINK肝組織模型試劑盒B使用方法與應用實例

說明
肝組織模型試劑盒提供了用于包封肝細胞和/或星狀細胞的最佳生物墨水，然后進一步利用所提供的抗體通過免疫熒光或免疫組織化學進行功能分析。

包含：
· GelXA LAMININK 111 Bioink-3 mL
· Ⅰ型膠原抗體*-100µL
· ABCC2抗體*-100µL
· CYP3A43抗體*-100µL
*宿主：兔，已驗證物種反應性：人

儲存
生物墨水應該儲存在攝氏4到8度之間。生物墨水的保質期是兩個月。包裝上注明了有效期。在儲存之前，確保墨盒蓋上蓋子，以防干燥。保持生物墨水不凍-將生物墨水放入冷凍室有可能損害其印刷適性。如果從紫外線防護墨盒轉印，請保持生物墨水不受光影響， 以避免在印刷前交聯(lián)。在黑暗模式下使用3D生物打印機。光引發(fā)劑對反復或長時間暴露于熱敏感。

抗體到達后應保存在-20°C。當儲存在-20°C時，抗體的作用至少為12個月。注意，抗體是非常穩(wěn)定的，當適當儲存時，可以使用更長的時間。抗體在-20°C保存前不需要等分。由于抗體是在甘油中提供的，它們在推薦的儲存溫度下不會凍結，因此不會暴露于冷凍/解凍循環(huán)中。
 
與細胞混合
建議將GelXA LAMININK 111預熱至37°C，然后再與細胞混合。我們建議將生物墨水與細胞混合之前將 GelXA LAMININK 111 加熱至 37°C。 我們建議將 bioink與高濃度細胞混合。您可以手動混合細胞，也可以使用我們革命性的 CELLMIXER 進行更大數(shù)量的混合。CELLMIXER 旨在簡化胞混合過程，并使細胞活力增加的均勻懸浮液成為可能。有關更多詳細信息，請參閱與細胞混合方案GelXA 系列。

生物打印組織模型
肝組織模型可以通過在所需生物墨水（GelXA  LAMININK  111）中逐層生物打印肝細胞和
/或星狀細胞來生成。如果用原代細胞進行生物打印，有限的細胞數(shù)目將限制構建體的大小。因此，10-50µL的結構、液滴或圓盤足以用于藥物篩選目的。還可以生成更大的構造，特別是當需要單元格分層時。訪問我們的網(wǎng)站下載生物打印肝組織模型的示例代碼。
 
交聯(lián)
GelXA層狀油墨111生物打印構建物的交聯(lián)用BIO X上的光固化模塊和/或用含CaCl2的交聯(lián)溶液進行。如果同時使用兩種交聯(lián)方法，則從光固化開始。在光固化之前，建議將印版溫度降低到15°C。將印版放置在冰面上，使GelXA層印墨111短暫凝固。在交聯(lián)劑中30秒至5 分鐘溫育時間對于大多數(shù)結構是足夠的。孵育后，除去交聯(lián)液，用含鈣和鎂的Hank's平衡鹽溶液(HBSS+/+)或基礎細胞培養(yǎng)基洗滌并加入所需的細胞培養(yǎng)基。
 
組織學分析
要獲得生物打印結構的 5-8 µm 部分，請參閱CELLINK 網(wǎng)站上支持部分下的固定、嵌入和切片協(xié)議GelXA 系列。 然后按照免疫熒光染色協(xié)議GelXA 系列用抗體染色組織模型。 I型膠原蛋白、ABCC2 和CYP3A43抗體的稀釋度如下：
 
GelXA Bioink描述
基于GelXA的生物油墨提供了GelMA的生物特性，在更寬的溫度范圍（如室溫）下具有印刷適性。GelXA生物油墨具有雙重離子和光誘導交聯(lián)能力，以更好地調節(jié)細胞敏感性，并允許調節(jié)構建體的機械特性，使其具 有更多的組織特異性。GelXA bioink系列在明視場和熒光觀察中提供最小的光學干擾，用于無損分析。在組織化學分析中，GelXA也將具胞和細有最小的背景效應，允許集中研究細胞-細胞-基質的相互作用。

抗體描述
肝組織模型的直接功能分析可以通過免疫熒光或免疫組化的組織學分析進行。肝組織模型試劑盒中包含的抗體用于肝細胞和星狀細胞在生物打印構建體中的單一或共培養(yǎng)。I型膠原抗體是用來評估在纖維化誘導過程中星狀細胞產生I型膠原的情況。ABCC2抗體用于評價肝細胞中轉運體多藥耐藥蛋白2(MRP2),CYP3A43抗體用于分析細胞色素P450中負責藥物代謝的一種酶。
 
肝抗體數(shù)據(jù)
用包括初級抗體I型膠原、ABCC2和CYP3A43的免疫熒光分析的內部數(shù)據(jù)證明了對不同肝細胞類型和來源的優(yōu)化使用。
 
圖1.實施例在用LX2和HepG2共培養(yǎng)7天的3D生物打印的GelXA層連接111中I型膠原的表達。合并圖像I型膠原表達（1:50稀釋度），綠色，細胞核用DAPI（1:50稀釋度）染色， 藍色。二抗：Alexa Fluor 488。放大倍數(shù)：10倍，刻度線：100µm。
 
圖 2. ABCC2 在 3D 生物打印 3D 生物打印 GelXA LAMININK 111 中的 ABCC2 表達示例，該 GelXA LAMININK 111 在共培養(yǎng) 7 天時裝載 LX2 和 HepG2。 ABCC2 (MRP2)抗體可用于染色肝細胞 HepG2 細胞系和原代肝細胞。 ABCC2 表達（1:200 稀釋）、綠色和用 DAPI（1:50 稀釋）染色的細胞核、藍色的合并圖像。 二抗：Alexa Fluor 488。放大倍數(shù)：10X，比例尺：100 µm。
 
圖3.作為肝組織模型的3D生物打印的原代肝細胞中CYP3A43表達的實例。CYP3A43抗體可用于原代肝細胞的團簇和單細胞染色。合并圖像CYP3A43表達（1:10 00稀釋度）,綠色, 細胞核DAPI（1:50稀釋度）染色,藍色。二抗：Alexa Fluor 488。放大倍數(shù)：10倍，刻度線：100µm。