naica️®微滴芯片數(shù)字PCR在探尋肝病石蠟樣本與新發(fā)現(xiàn)病毒關(guān)系的應(yīng)用

維也納獸醫(yī)大學(xué)的研究者們進(jìn)行了一項(xiàng)回顧性研究，用以評(píng)估馬細(xì)小肝炎病毒EqPV-H在蒂勒氏病以外的組織病理學(xué)異常的馬和驢肝臟中是否存在及其相關(guān)性，研究者們希望通過該研究確認(rèn)新發(fā)現(xiàn)不久的EqPV-H是否會(huì)導(dǎo)致其他的肝臟疾病，并且通過EqPV-H的感染情況進(jìn)一步分析EqPV-H病毒的感染模式。

亮點(diǎn)：

1.通過采用新技術(shù)的回顧性研究，對(duì)之前收集的樣本進(jìn)行分析，找到EqPV-H病毒可能與腫瘤性疾病存在關(guān)聯(lián)。

2. 憑借naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的直接絕對(duì)定量和對(duì)抑制劑的高耐受性，快速、高效的進(jìn)行拷貝數(shù)的檢測(cè)，確定組織樣本中的病毒含量。

3.通過對(duì)不同部位病毒含量的檢測(cè)進(jìn)一步佐證了EqPV-H病毒的嗜肝性，以及其慢性感染的可能性。

馬細(xì)小肝炎病毒是什么？

蒂勒氏病是一種與馬相關(guān)的急性、爆發(fā)性肝壞死疾病，該疾病1918年在南非發(fā)現(xiàn)，后續(xù)也不斷有馬出現(xiàn)該病，且主要與馬源性生物制品如馬血漿、破傷風(fēng)和肉毒中毒抗毒素的給藥有關(guān)，因此推測(cè)該病應(yīng)該與一種傳染性的病原體相關(guān)，但一直沒有找到該病原體。直到2018年，科學(xué)家在一匹接受破傷風(fēng)抗毒素后死于蒂勒病的馬的血清和肝臟樣本中檢測(cè)到一種未知病毒，新發(fā)現(xiàn)的病毒被命名為馬細(xì)小病毒肝炎EqPV-H。通過對(duì)最近的蒂勒氏病例檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該病毒在染病馬匹中均存在。且該病毒具有嗜肝性，血清和肝中的病毒載量最高。其他方面的研究也支持了該病毒是蒂勒氏病的病原體的假說。

本文則主要通過對(duì)之前的標(biāo)本進(jìn)行分析，探尋EqPV-H作為一種新發(fā)現(xiàn)的病毒，其是否還有一些其他的病理作用，是否與其他肝臟疾病相關(guān)？

回顧性的EqPV-H檢測(cè)結(jié)果如何？

研究者們收集了各類因肝組織病理學(xué)異常的臨床樣本，將其分為7組，包括腫瘤疾病，炎癥性疾病、肝硬化、循環(huán)障礙、毒性和肝代謝疾病、多種疾病（1-5組中2種以上的病理學(xué)特征）和正常肝組織。在這些收集到的92例肝臟樣本中，只有2例發(fā)現(xiàn)了EqPV-H病毒，且兩例均診斷為腹部腫瘤。但癌癥與機(jī)會(huì)性感染的高易感性是相關(guān)的，因?yàn)槟[瘤性疾病伴隨的全身虛弱和免疫抑制可能促進(jìn)EqPV-H繼發(fā)感染，所以EqPV-H是否可能是馬科動(dòng)物原發(fā)性肝腫瘤發(fā)生的誘因，需要進(jìn)一步的研究來評(píng)估。

通過對(duì)這兩例樣本的進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在這匹馬的脾臟組織（腫瘤轉(zhuǎn)移部位）以及心臟和肺組織中也可以檢測(cè)到非常低的EqPV-H。這與之前的研究相一致，肝臟中病毒載量最高，其他組織中含量較低但也可持續(xù)存在，這意味著該病毒可能存在慢性感染。

進(jìn)一步通過naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)對(duì)病毒的載量進(jìn)行絕對(duì)定量分析，EqPV-H核酸陽性的兩個(gè)肝臟樣本，病毒載量分別為5×103和9.5×103GE/百萬細(xì)胞，略低于其他研究中肝臟樣本1.26×104GE/百萬細(xì)胞到2.04×109GE/百萬細(xì)胞的病毒載量，這可能是慢性感染的另一個(gè)跡象。

▲ naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測(cè)肝臟1號(hào)和2號(hào)樣本中EqPV-H和細(xì)胞校正基因TTC17絕對(duì)定量結(jié)果。

由于這項(xiàng)研究是回顧性的，所有的組織樣本在室溫下被石蠟包埋1至17年，這可能會(huì)影響可檢測(cè)病毒的數(shù)量。但仍然在其中2匹腫瘤性疾病的馬樣本中檢測(cè)到EqPV-H病毒，這表明EqPV-H感染和腫瘤性疾病之間可能存在關(guān)聯(lián)甚至相互作用。

盡管這篇文章最終并未得出某種疾病與EqPV-H的確切關(guān)系，但是通過naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)這樣的新技術(shù)和新發(fā)現(xiàn)的病毒EqPV-H對(duì)以前的樣本進(jìn)行回顧性研究，仍然發(fā)現(xiàn)了一些之前從未了解到的新內(nèi)容，也為其他的研究提供了新的思路和方向。

期刊《viruses》

Viruses (ISSN 1999-4915) 是一個(gè)國際性開放獲取期刊， 至今已被SCIE、PubMed 、Scopus等各類數(shù)據(jù)庫索引，其最新影響因子為3.465。作為病毒學(xué)研究的高級(jí)論壇，該期刊旨在幫助研究人員細(xì)致的展示他們的前沿發(fā)現(xiàn)和觀點(diǎn)，并使其迅速傳播。

naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司的naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)在進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。該系統(tǒng)利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個(gè)微滴的形式進(jìn)入2D芯片中。3色熒光檢測(cè)儀器，整個(gè)流程只需要2.5小時(shí)，并可進(jìn)行數(shù)據(jù)的質(zhì)控和結(jié)果追溯分析，獲得的數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

naica^®六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica^®六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動(dòng)化微滴生成和擴(kuò)增，每個(gè)樣本孔可實(shí)現(xiàn)6熒光通道的檢測(cè)，智能化識(shí)別微滴并進(jìn)行質(zhì)控，3小時(shí)內(nèi)即可獲得至少6個(gè)靶標(biāo)基因的絕對(duì)拷貝數(shù)濃度。