naica®微滴芯片數(shù)字PCR在新冠病毒母嬰垂直傳播研究的應(yīng)用

最近，人們發(fā)現(xiàn)新冠病毒SARS-CoV-2有可能在母嬰之間進行垂直傳播，而這種傳播的后果，無論是胎兒還是新生兒，均尚不清楚。來自法國艾克斯-馬賽大學的科學家在《Clinical Infectious Diseases》雜志上發(fā)表了一篇名為Congenital Infection of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 With Intrauterine Fetal Death: A Clinicopathological Study With Molecular Analysis 的文章，該文章是關(guān)于SARS-CoV- 2因母胎傳播而繼發(fā)胎死腹中并伴有先天性感染，胎盤和胎兒組織損傷的第一篇報道。

文中采取個案研究的方式，來自于一個SARS-CoV-2孕中期先天性感染的病例。一名孕婦在SARS-CoV-2檢測呈陽性后入院觀察。隨后檢測到胎兒只有少量運動，羊水正常，胎盤形態(tài)正常。第二天，患者出現(xiàn)失血，胎兒運動減少。在超聲檢查中未發(fā)現(xiàn)胎兒心臟活動。在引產(chǎn)后，這對夫婦提出并同意了胎兒和胎盤的病理學檢查。后續(xù)采用免疫化學，RT-qPCR和RT-dPCR對胎兒和胎盤進行病理學檢查和SARS-CoV-2基因組變異分析。

為了提高SARS-CoV-2基因組檢測的靈敏度，文中作者采用naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)進行檢測。在SARS-CoV-2病毒RNA的3個特異性區(qū)域設(shè)計引物和雙標記探針：NI和N2為N基因，IP2為RdRP基因。均在FAM通道中檢測熒光信號，可以提高檢測的敏感性和特異性，在HEX通道中測量的人類基因被用作內(nèi)部控制來驗證樣本的存在。

▲利用RT-dPCR技術(shù)，從陽性對照(PAC)、固定肺組織和胎盤檢測SARS-CoV-2病毒載量的2D微滴圖。(A)HEX通道的陽性微滴檢測內(nèi)源性細胞。(B)FAM通道檢測3個SARS-CoV-2靶點。(C)在FAM通道和HEX通道均可以檢測到內(nèi)源性細胞和SARS-CoV-2靶點。(D)陰性微滴

通過臨床病理學和分子水平的綜合分析，結(jié)果表明：胎盤發(fā)生組織學病變，出現(xiàn)組織細胞間炎癥和滋養(yǎng)層細胞壞死。胎兒表現(xiàn)出輕微的生長限制，出現(xiàn)肝細胞損傷和含鐵血黃素沉著癥，在胎兒組織中沒有發(fā)現(xiàn)炎癥細胞，在福爾馬林固定胎盤、冷凍胎盤標本和胎兒肺和肝樣品中均檢測到SARS-CoV-2，在福爾馬林固定胎盤組織中檢測到最高的病毒載量。

本案例中，SARS-CoV-2孕中期先天性感染，伴有子宮內(nèi)胎兒死亡，繼發(fā)于SARS-CoV-2感染的極度彌漫性胎盤損傷特征。母胎交換嚴重受損，導(dǎo)致胎兒缺氧伴心力衰竭和胎盤組織中高水平的病毒RNA。因此，在疑似SARS-CoV-2垂直傳播的病例中，應(yīng)考慮對孕婦進行產(chǎn)科急診管理，特別是存在血小板減少癥導(dǎo)致胎兒移動減少的情況下。

原文鏈接：https://doi.org/10.1093/cid/ciab840