Octet®非標(biāo)記分子互作技術(shù)應(yīng)用：國(guó)內(nèi)新發(fā)表高水平文章解析

僅2022年第一季度，Octet®國(guó)內(nèi)CNS文章就達(dá)到了5篇！涉及各種高通量、粗樣品的動(dòng)力學(xué)和競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)，也和我們身邊新冠疫苗和治療手段息息相關(guān)。今天，陳老濕就來(lái)介紹一下這幾篇文章。

🔺科興滅活疫苗加強(qiáng)針可提升對(duì)奧密克戎感染的重癥保護(hù)^[1]

從多名三劑新冠疫苗接種者的新冠特異性記憶B淋巴細(xì)胞中成功獲得323株全人源抗體，用Octet® RED384檢測(cè)發(fā)現(xiàn)這些抗體都與野生型的新冠病毒S蛋白高親和力結(jié)合，其中24株對(duì)奧密克戎等突變株均有比較強(qiáng)的抑制活性。這表明三劑疫苗免疫后，約7%的記憶B淋巴細(xì)胞攜有廣譜性中和抗體。從中選取了幾株活性最高的廣譜性抗體（比如編號(hào)347，265抗體），并對(duì)其與S蛋白的復(fù)合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析，發(fā)現(xiàn)了奧密克戎的抗體逃逸表位G446S。
 
🔺可霧化吸入的廣譜抗新冠全人源納米雙抗藥/復(fù)旦大學(xué)^[2]

復(fù)旦大學(xué)應(yīng)天雷組研發(fā)了一種治療新冠的廣譜雙特異性全人源納米抗體Bn03，該抗體由該課題組之前發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)靶向病毒S蛋白的保守表位的納米抗體n3113v和n3130v重組而成，能夠高效中和包括奧密克戎在內(nèi)的各種流行變異株。同時(shí)，因分子量比較小可作為霧化吸入制劑，在新冠輕癥和重癥小鼠模型中顯現(xiàn)出很好的療效。論文還發(fā)現(xiàn)了一類隱藏在病毒刺突蛋白三聚體內(nèi)部的高度保守表位，對(duì)廣譜疫苗和藥物的研發(fā)具有啟示作用。

接種疫苗后血清RBM（受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域）抗體和非RBM抗體測(cè)試：將RBD結(jié)合在NTA傳感器上，直接與血清結(jié)合的BLI信號(hào)Xt為所有RBD抗體，先結(jié)合ACE2再結(jié)合血清信號(hào)為Xm的是非RBM抗體，RBM抗體為Xt-Xm。發(fā)現(xiàn)非RBM抗體與奧密克戎的結(jié)合活性密切相關(guān)。

應(yīng)老師組是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)新冠抗體的課題組，請(qǐng)點(diǎn)這里。

🔺西湖大學(xué)發(fā)現(xiàn)艱難梭菌毒素入侵人體的新受體^[3]

艱難梭菌是一種厭氧的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，會(huì)導(dǎo)致抗生素相關(guān)性腹瀉和偽膜性腸炎等疾病，其中一個(gè)分支會(huì)分泌TcdB2，TcdB4毒素。目前，這些毒素在小腸上皮的受體并不明確。西湖大學(xué)陶亮組用CRISPR/Cas9的基因敲除文庫(kù)篩選技術(shù)發(fā)現(xiàn)了組織因子途徑抑制因子（TFPI）是這些毒素的受體。并解析了TFPI/ TcdB4復(fù)合物結(jié)構(gòu)。用Octet®檢測(cè)了兩者之間的親和力，同時(shí)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，TcdB4與FXa均可與TFPI的同一loop結(jié)合，相互之間是競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。這與前人的研究以及結(jié)構(gòu)學(xué)是完全一致的。這項(xiàng)研究對(duì)于揭示和理解艱難梭菌感染的致病機(jī)制，并且為超毒力分支菌株引起的艱難梭菌的感染預(yù)防和治療新方法的開(kāi)發(fā)提供了重要的理論依據(jù)。
 

  另外兩篇文章，主要檢測(cè)奧密克戎S蛋白和人受體ACE2以及中和抗體的親和力，BLI數(shù)據(jù)質(zhì)量良好,與前面文章類似，就不做一一介紹了^[4][5]。

Octet®分子互作分析系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于：

• 非標(biāo)記Direct binding是趨勢(shì)，結(jié)果更準(zhǔn)確;
• 快速測(cè)定親和力，更加定量化地表征分子互作;
• 無(wú)洗滌步驟，可測(cè)弱親和力（解離快）;
• 寫入了美國(guó)藥典，文章多，認(rèn)可度廣;
• 萬(wàn)金油技術(shù)，可以用與檢測(cè)DNA，小分子，蛋白質(zhì)等各種生物分子，比如這篇文章檢測(cè)的就是病毒顆粒樣品;
• 操作簡(jiǎn)便，耗材及維護(hù)成本低。

作為成熟的分析方法，Octet®已協(xié)助包括新冠疫苗在內(nèi)的多種疫苗的研究和開(kāi)發(fā)，應(yīng)用于多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，包括表位設(shè)計(jì)、識(shí)別及特征分析，病原體多樣性和分布，抗體親和力測(cè)定，宿主免疫反應(yīng)特征、多樣性和分布，核酸和分子病原體-宿主相互作用研究，以及治療藥物及臨床研究等。了解更多基于Octet®的疫苗研發(fā)策略，觀看講座：

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